摘要：目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bfgf)、成纤维细胞生长因子受体1(fibro-blastgrowthfactorreceptor1,FGFR1)及bfgfmRNA三者与肿瘤细胞(神经胶质瘤细胞)恶性行为的相关性。方法:设计、合成bfgf反义寡核苷酸,转染SWO-38神经胶质瘤细胞,用原位杂交、免疫组化及图像分析、间接ELISA、细胞增殖MTT法、细胞集落形成等方法,分别检测转染前后bfgf、FGFR1、bfgfmRNA表达的改变,观察不同剂量bfgf反义寡核苷酸转染后细胞生长、集落形成的变化。结果:大部分细胞bfgfmRNA和细胞生长可被bfgf反义寡核苷酸抑制,细胞生长的抑制呈浓度依赖性,最高抑制率可达到48%,其抑制作用可被外源性bfgf完全逆转;反义寡核苷酸处理组大部分细胞表达的FGFR1减少、细胞分泌的bfgf明显减少,集落形成抑制率达35%;外源性bfgf的逆转作用为8%。正义组和阴性对照组均无以上的明显改变。结论:揭示了反义寡核苷酸可特异性抑制bfgfmRNA和肿瘤细胞的bfgf合成表达,但不能拮抗外源性bfgf结合bFG-FR的生物学作用;FGFR1随肿瘤细胞SWO-38中bfgf表达水平的降低而下调。

摘要：同种异体半关节移植作为修复创伤和肿瘤切除术后骨缺损的一种治疗方法,具有一定的临床地位.异体骨移植失败的原因,主要为排斥反应、植骨血供不足和延迟愈合与不愈合.为探讨解决上述问题的方法,笔者设计了深冷冻异体骨加促诱导成骨和促血管生成的细胞因子复合应用的移植方法,对异体半关节移植愈合过程和植骨血管化进行实验观察和探讨.

摘要：目的:构建含嵌合内含子和抗bfgf抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中表达,探讨嵌合内含子对抗体表达的影响。方法:设计引物分别从载体pCl-neo和pComb3-Fab25中扩增出内含子和抗体Fd段、κ链基因序列,按不同组合构建到含人免疫球蛋白IgG1恒定区Fc段基因的表达载体pIgG中。重组质粒经脂质体PEI转染293T细胞,荧光显微镜观察质粒转染情况,采用夹心ELISA和Western blot检测细胞上清中抗体的表达。结果:DNA测序和酶切分析表明,内含子和抗体基因成功插入pIgG,获得了重组质粒pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron。倒置荧光显微镜下可观察EGFP大量表达,Western blot分析上清中有抗体的表达,夹心ELISA检测pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron抗体表达量分别为1.21mg/L、0.468mg/L、7.39mg/L、0.601mg/L。结论:成功构建了含嵌合内含子和抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中得到表达。嵌合内含子插入κ链基因5′端可提高抗体的表达,插入Fd段5′端则抑制抗体的表达。

摘要：目的探讨硫代修饰对bfgf寡核苷酸抑制HepG2和Hep2细胞增殖的影响。方法设计、合成bfgf寡核苷酸,聚乙烯亚胺(jetPEI)介导其转染入HepG2和Hep2细胞,荧光显微镜观察其在细胞中的定位,流式细胞仪分析转染效率,MTT法检测细胞增殖。结果bfgf反/正义硫代寡核苷酸被jetPEI介导高效转染入细胞内,主要位于细胞核。反/正义硫代寡核苷酸均呈剂量时间依赖地抑制细胞增殖,相同剂量时正硫代寡核苷酸的抑制效率高于反义硫代寡核苷酸。相应非修饰反义寡核苷酸较其互补正义链能更有效抑制两种细胞增殖。核苷酸突变明显降低反义硫代寡核苷酸对细胞抑制,并不影响正义硫代寡核苷酸的细胞抑制率。反义硫代寡核苷酸明显降低细胞中bfgf表达。结论硫代修饰bfgf反义寡核苷酸在细胞内特异性结合核酸以反义机制抑制肿瘤细胞增殖,正义寡核苷酸则因硫代修饰于细胞内以非核酸特异性机制抑制肿瘤细胞增殖。

摘要：目的:研究bfgf反义硫代寡核苷酸增强肿瘤细胞对化疗药物敏感性作用。方法:设计、合成bfgf寡核苷酸,用聚乙烯亚胺(polyemyleneimine,PEI)介导bfgf反义硫代寡核苷酸转染入黑色素瘤B16细胞,MTT法检测bfgf反义硫代寡核苷酸及其与化疗药物联合处理后的细胞增殖率;半定量RT-PCR测定bfgf反义硫代寡核苷酸转染后细胞中bfgf mRNA水平;流式细胞仪分析bfgf反义硫代寡核苷酸诱导的细胞凋亡。结果:bfgf反义硫代寡核苷酸对B16细胞增殖的抑制率为64.8%,且呈剂量依赖效应。B16细胞中bfgf mRNA被bfgf反义硫代寡核苷酸显著降低,为对照细胞的57.9%,且bfgf反义硫代寡核苷酸诱导B16细胞凋亡,凋亡率为41.8%。bfgf反义硫代寡核苷酸转染能显著增强B16细胞对阿霉素、5-氟脲嘧啶及顺铂的敏感性,非特异性硫代寡核苷酸不影响阿霉素、5-氟脲嘧啶及顺铂抑制B16细胞增殖。结论:bfgf反义硫代寡核苷酸显著增强B16细胞的化疗敏感性,表明其可协同化疗药物用于治疗肿瘤。

摘要：目的 通过碱性成纤维细胞生长因子/胎儿骨(bfgf/FB)复合骨植入下颌智齿拔除后牙槽窝,观察其预防干槽症的临床效果,为预防干槽症提供有效方法。方法 将bfgf/FB复合骨与单纯FB骨分别制备成外形色泽一样的植入材料,双盲法编为Ⅰ、Ⅱ号,按患者就诊顺序以完全随机分组,设计分为A、B、C三组,每组30例。A组用Ⅰ号材料,B组用Ⅱ号材料,C组为常规拔牙槽窝内不放任何材料。结果 植入Ⅰ、Ⅱ号材料组均无干槽症发生,空白组有3例干槽症,发生率为10％。3组病例的一般情况,阻生类型、手术方时间和术后处理经均衡性检验,无显著性差异。结论 bfgf/FB复合骨的植入在预防干槽症中起到重要作用。

摘要：目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (bfgf)对犬牙周成纤维细胞样细胞增殖的影响。方法　选用 4只成年杂种犬 ,将其上颌两侧的前磨牙 (P1_3)、第一磨牙 (M1 )、下颌两侧的前磨牙 (P2_4 )、第一磨牙 (M1 )作为实验牙。在每个象限 4个实验牙的近中根颊侧人工制备“U”形骨缺损 ,并设计为 4组 ,即对照组、bfgf组、ePTFE组、bfgf +ePTFE组。每周手术 1次 ,每次手术做 1个象限的 4个牙位 ,连续 4次。完成 4次手术后 1周处死动物。动物处死前 1h注射尿嘧啶脱氧核苷 (BrdU) ,标本行免疫组化染色 ,显微镜下计数BrdU标记的成纤维细胞样细胞。结果　各组中BrdU+ 细胞数均于术后 2周最多 ,术后 3、4周显著减少。术后 1、2周 ,bfgf组和bfgf +ePTFE组的BrdU+ 细胞明显多于对照组和ePTFE组。结论　牙周术后 2周是牙周功能细胞增殖的活跃期 ,bfgf的局部应用可明显促进牙周愈合早期牙周功能细胞的增殖 。

摘要：目的:观察靶向siRNA抑制恶性黑色素瘤细胞株A375同源盒基因HOXB7表达后,对相应生长因子bfgf表达水平及A375细胞生物学特性的影响。方法:根据HOXB7基因设计3条序列特异性的siRNA(si-HOXB7-1,si-HOXB7-2,si-HOXB7-3),在脂质体Lipofectamine2000的介导下转染A375细胞,采用RT-PCR和FCM法来观察HOXB7及bfgf的基因沉默效应。MTT法检测A375细胞体外增殖活性。结果:3条siRNA均能不同程度地下调A375细胞HOXB7表达水平,第3条序列能更有效地封闭HOXB7基因,而空转组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:靶向HOXB7基因的siRNA可有效沉默HOXB7基因及其调控的基因bfgf的表达,并控制恶性黑色素瘤细胞的生长。

摘要：为研究猪miR-148a(ssc-miR-148a)的转录调控机制,对其启动子进行了克隆及分析。本试验首先设计特异性PCR扩增引物,分别得到ssc-miR-148a前体上游3个片段,并将其连接到荧光素酶报告载体pGL3-Basic上。通过生物信息学方法,在线分析ssc-miR-148a启动子大概区域、甲基化部位和转录因子结合部位。将重组报告质粒转染293T细胞,分析启动子活性。采用不同浓度碱性成纤维生长因子(bfgf)处理猪成纤维细胞和转染有重组报告质粒的猪成纤维细胞,检测ssc-miR-148a和DNA甲基化转移酶1(DNMT1)的表达,及其对启动子活性的影响。结果显示,克隆得到的ssc-miR-148a启动子区2 043bp片段具有启动子活性,该序列存在5个CpG岛、Sp1及AP2等转录因子结合位点。0、5和10ng·mL-1浓度bfgf处理猪成纤维细胞和转染重组报告质粒的猪成纤维细胞后,ssc-miR-148a表达均显著下降(P0.05)。结果表明,ssc-miR-148a启动子位于前体上游2 043bp片段内,启动子区域有转录因子SP1结合位点,其表达受bfgf的调控。

摘要：翼状胬肉是常见的眼表疾病之一,术后创面复发率较高.瘢痕组织增生、睑球粘连等并发症的形成,给再手术带来较大困难.因此,改进或设计新的手术方式,加速角膜创面愈合是减少术后病变复发的关键.笔者应用人羊膜移植联合碱性成纤维细胞生长因子( bfgf,商品名贝复舒,珠海亿胜生物制药有限公司)治疗翼状胬肉,取得了满意的临床效果.