摘要：Objective It has been reported that B-cell lymphoma 2 （bcl-2） enhances neurogenesis as well as supporting axonal growth after injury. In the present study, we investigated whether bcl-2 overexpression plays a role in the formation of newborn striatonigral projection neurons in the adult rat brain after transient middle cerebral artery occlusion （MCAO）. Methods We infused human bcl-2-expressing plasmid （pbcl-2） into the lateral ventricle immediately after 30 min of MCAO, injected 5＇-bromodeoxyuridine （BrdU） intraperitoneally to label proliferative cells, and microinjected fluorogold （FG） into the substantia nigra at 11 weeks of reperfusion followed by multiple immunostaining of striatonigral projection neurons at 12 weeks. Results We found that pbcl-2 treatment significantly increased the number of newborn neurons （BrdU＋-NeuN＋） in the striatum ipsilateral to the MCAO. We further detected newborn striatonigral projection neurons （BrdU＋-FG＋-NeuN＋） in the ipsilateral striatum at 12 weeks. More interestingly, the number of newborn striatonigral projection neurons （BrdU＋-FG＋） was significantly increased by pbcl-2 treatment compared to that by pEGFP, a control plasmid. Conclusion Taken together, we found that bcl-2 overexpression in the brain enhanced the generation of newborn striatonigral projection neurons. This provides a potential strategy for promoting the reestablishment of neural networks and brain repair after ischemic injury.

摘要：细胞的凋亡是维持机体平衡的重要因素。细胞凋亡由一系列细胞因子调控。bcl-2蛋白家族是细胞凋亡的关键性调节因子。bcl-2家族分为抗凋亡和促凋亡两个亚族,他们的相互作用对细胞凋亡信号传导起调控作用。很多肿瘤细胞高表达bcl-2抗凋亡亚族成员bcl-2/bcl-xL。近年来,随着bcl-2家族各成员的晶体结构相继阐明,人们开始寻找作用于bcl-2家族抗凋亡亚族蛋白的小分子抑制剂。本文从药物设计角度对该方面的进展作一综述。

摘要：目的寻找一种敏感、特异的方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLbcl)bcl-2/IgH基因重排,并通过测定产物的序列,以了解所建方法的可靠性。方法运用专业引物设计软件设计bcl-2/IgH基因重排半巢式PCR引物,对52例经临床病理确诊的DLbcl石蜡包埋组织及10例慢性扁桃体炎患者的新鲜扁桃体组织通过半巢式递降温度梯度PCR(touch down PCR)扩增,检测bcl-2/IgH基因重排,并对其产物进行克隆和序列分析。结果通过一步法检测到bcl-2/IgH基因重排8例,其中DLbcl6例,新鲜扁桃体组织2例;进行第2次半巢式PCR时仅在DLbcl中发现5例阳性,新鲜扁桃体组织均阴性。将阳性产物在网上序列分析显示:一步法检测到的8例中有3例为假阳性,而半巢式PCR扩增出的5例均为bcl-2/IgH基因重排片段。3例假阳性的片段分别与人类第19号染色体BAC331191,LLNLR-245D11基因片段及1号染色体RP11-498P10基因片段同源。结论常用的检测bcl-2/IgH基因重排引物扩增结果存在一定假阳性,其机制可能是因为人类基因组中存在与常用引物同源性较高的序列。为研究设计的引物与传统的引物结合,进行半巢式PCR可以排除这种假阳性扩增,提高诊断的准确性。

摘要：寻找在bcl 2mRNA上除了起始区以外的反义寡核苷酸作用的敏感位点和观察这些核苷酸对白血病细胞的阿糖胞苷敏感性的影响。用RNAstructure软件模拟bcl 2mRNA的二级结构设计合成两端硫代修饰反义寡核苷酸 ,用MTT法测定抑制HL 6 0和K5 6 2细胞的阿糖胞苷半数抑制浓度 (IC50 )值 ;用流式细胞术检测HL 6 0和K5 6 2细胞凋亡率和bcl 2蛋白表达水平。结果发现 ,10 μmol Lbcl 2基因的反义寡核苷酸同Ara C结合使用 ,能明显地抑制HL 6 0和K5 6 2细胞bcl 2基因蛋白的表达 ,促进细胞凋亡 ,减低Ara C的IC50 值 ;同时发现针对蛋白编码区的反义寡核苷酸有更强的作用。结论 :除了bcl 2mRNA的起始区外 ,在bcl 2mRNA的其他部位存在有设计反义寡核苷酸更有效的位点 。

摘要：目的应用RNA干扰技术抑制人晶状体上皮细胞（HLEC）bcl-2基因表达，观察诱导其细胞凋亡情况，为防治晶状体后囊膜混浊提供新的策略。方法实验研究。设计2条以bcl-2基因为靶标的短发夹RNA（shRNA），克隆入质粒PGCsi表达载体，分别命名为P1、P2，经脂质体转染入永生性HLEC系SRAO1／O4，48h后检测转染效率和bcl-2的基因及蛋白表达情况，并检测HLEC的细胞凋亡情况。多组间及组间计数资料的比较，采用随机区组设计的方差分析。结果重组质粒经自动基因测序仪测序，证实构建成功。转染后48h，流式细胞仪测得P1、P2转染率为44．1％、47．2％。免疫印迹法测得P1、P2组的bcl-2蛋白表达较对照组降低，实时荧光定量聚合酶链反应法测得P1、P2组的bcl-2mRNA相对表达量为0．435、0．476，较对照组降低（F=1672．4，P〈0．05），流式细胞仪双染法测得P1、P2组HLEC的细胞凋亡率分别为42．3％、45．4％，较对照组增加（F=1756．2，P〈0．05），并且活化型caspase-3蛋白的表达增加。结论P1、P2可抑制HLEC的bcl-2基因表达，并诱导HLEC凋亡.

摘要：目的:构建bcl-2特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步观察其对膀胱癌细胞生长的影响。方法:根据GenBank提供的bcl-2cDNA序列,设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与含U6启动子的pGenesil-1质粒定向连接,构建真核表达载体pGenesil-1545、pGenesil-1555。经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。转染T24细胞,采用半定量RT-PCR观察重组质粒对bcl-2 mRNA表达的影响;用MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用。结果:构建了bcl-2siRNA的真核表达载体pGenesil-1545、pGenesil-1555,并经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致。转染T24细胞72h后,RT-PCR显示bcl-2基因表达下调接近80%;MTT发现T24细胞的体外生长受到明显抑制。结论:bcl-2的特异性siRNA真核细胞表达载体成功构建,有效沉默bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,抑制了癌细胞的生长。

摘要：目的探讨低氧反应元件(HRE)介导的bcl-2基因沉默对缺氧诱导抗凋亡肺微血管内皮细胞的影响。方法设计针对bcl-2的siRNA序列,构建含bcl-2-shRNA和HRE的表达载体并进行慢病毒包装,重组病毒感染肺微血管内皮细胞,分别在常氧(21%)或低氧(5%)条件下培养;96 h后通过荧光标记物确认感染效率,Western blotting检测转染后细胞内bcl-2蛋白表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 bcl-2基因沉默明显下调细胞内bcl-2 mRNA和蛋白的表达;HRE启动子仅在低氧环境中活性显著增强;重组慢病毒感染肺微血管内皮细胞后96 h时的转染效率约为90%,细胞内bcl-2蛋白表达下调,细胞凋亡增加;在低氧环境中,受HRE的调控,Lv-HRE-bcl-2-shRNA组细胞凋亡率显著增高。结论低氧条件下,HRE作为氧敏感调控开关,可进一步增强bcl-2-shRNA的作用,诱导肺血管内皮细胞凋亡,这将为肺动脉高压的血管重塑提供潜在的治疗靶标。

摘要：　为深入研究bcl 2对细胞凋亡的调控机制和肿瘤发生发展的影响,应用基因重组手段,根据表达载体pEGFP C1上的多克隆位点和bcl 2基因序列设计了1对引物,对含有bcl 2基因的质粒pWB bcl进行了PCR扩增,得到了708bp的目的片断。将其克隆到pMD18 Tvector,筛选阳性克隆并测序,序列分析表明,其与原初序列同源性达99%。将bcl 2插入到载体启动子下游,与报告基因绿色荧光蛋白(EnhancerGreenFluorescentProtein,EGFP)融合,经限制性内切酶酶切和PCR鉴定,证明bcl 2/EGFP真核表达质粒构建成功。

摘要：背景:在器官移植急性排斥反应过程中,靶细胞的凋亡被认为是移植物功能丧失的主要作用途径之一。细胞凋亡受一系列分子调控,其中bcl-2家族起着决定性作用;Fas系统介导的细胞凋亡亦在移植免疫中起十分重要的作用。目的:分析移植肾发生急性排斥反应时bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白表达规律与急性排斥反应预后的关联。设计、时间及地点:观察对比实验,于2002/2005在解放军总医院第二附属医院器官移植中心完成。对象:收集肾移植术后发生急性排斥反应的移植肾穿刺活检蜡块标本30例;另选同期20例无明显排斥反应表现肾移植患者的移植肾穿刺活检蜡块标本作为对照组。方法:应用免疫组织化学方法检测移植肾急性排斥反应穿刺活检标本中bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白的表达水平,并与对照组进行对比。主要观察指标:急性排斥组和对照组移植肾穿刺活检标本中bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白的表达水平。结果:①bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白主要在肾小管上皮细胞中表达。②两组肾小管上皮细胞中bcl-2表达水平差异无显著性意义(P>0.05),急性排斥反应组肾小管上皮细胞中Bax,Fas及FasL蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05)。结论:在肾移植急性排斥反应中bcl-2家族可能参与调控细胞凋亡,引起移植肾免疫损伤;Fas及FasL可能直接参与移植肾急性排斥反应,造成肾小管上皮细胞凋亡,引起移植肾免疫损伤。

摘要：目的对近年来bcl-2蛋白小分子抑制剂的研究进展作以综述。方法根据近期对bcl-2蛋白小分子抑制剂的21篇相关文献进行整理和归纳。结果和结论bcl-2蛋白是很有开发潜力的靶点,依据此靶点而设计出的bcl-2蛋白小分子抑制剂,可以消除或减弱癌细胞对凋亡的耐药性,有望成为新一代抗癌药物。