摘要：根据已发表的bcl-2基因序列设计3对siRNA（Small interference RNA）序列，构建干扰表达载体，转染体外培养的鹅卵泡颗粒细胞，48h后利用流式细胞术（Flow cytometry，FCM）检测颗粒细胞bcl-2蛋白表达量、凋亡和增殖情况，收集细胞培养液用放射免疫分析法检测孕激素（P）的分泌水平；此外，还检测了F1～F4卵泡、最小的排卵前卵泡（The smallest preovulatory follicle，SPF）、小黄卵泡（Small yellow follicle，SYF）和闭锁卵泡（Atresic follicle）颗粒细胞bcl-2蛋白表达和凋亡情况。结果表明：（1）各级卵泡颗粒细胞bcl-2蛋白的表达存在着差异，正常卵泡颗粒细胞bcl-2蛋白表达量显著高于闭锁卵泡（P〈0．05），SPF颗粒细胞bcl-2蛋白表达水平显著高于SYF（P〈0．05）；（2）干扰组bcl-2蛋白表达水平显著低于所有对照组（P〈0．05），而细胞凋亡指数（Apoptosis index，AI）、增殖指数（Proliferation index，PI）和P分泌水平均高于对照组。

摘要：目的:研究siRNA (smallinterferenceRNA)对大细胞肺癌细胞株NCI -H4 6 0bcl- 2基因表达的影响。方法:利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl - 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入NCI-H4 6 0细胞株,设置转染bcl- 2反义药物G3139和空白两对照组。用MTT法检测siRNA对细胞生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期的改变和bcl- 2蛋白表达;RT -PCR检测bcl- 2mRNA水平。结果:siRNA组与对照组细胞存活率均有显著性差异(P <0 0 5 ) ;siRNA组bcl- 2的mRNA明显低于对照组和反义组(P <0 0 5 ) ;siRNA组bcl- 2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组以及反义组细胞阻滞于S期。结论:体外转录合成的siRNA可抑制NCI-H4 6 0细胞bcl- 2基因的表达,抑制率可达5 0 %以上。

摘要：目的利用pgenesil-1质粒载体,以bcl-2为靶基因,设计构建重组体,以用于后继的RNA干扰研究。方法设计3对有小发夹结构的两条DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至转录载体pgenesil-1上构建重组体,转化DH5a菌株,提取质粒行酶切电泳鉴定后,进行测序分析。结果将合成的DNA片段退火后克隆至载体上,经酶切及序列鉴定为目的序列。结论靶向bcl-2基因转录shRNA的重组质粒可以在体外成功构建,为下一步利用该重组体干扰肿瘤细胞中bcl-2的mRNA转录,探索肿瘤基因治疗的新途径打下基础。

摘要：为扩增蒙古绵羊bcl-2基因5′端,根据Gen Bank上已公布的牛的序列,设计了2条引物。从蒙古绵羊脾中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出bcl-2的c DNA,并重组到p Blueselect T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,测出5′RACE产物434个核苷酸序列,该序列包括C端144个氨基酸编码序列、翻译起始密码子ATG。

摘要：为扩增蒙古绵羊bcl-2基因和基因,根据Gen Bank上已公布的牛的序列,设计了4条引物。从蒙古绵羊脾中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出bcl-2和Bax的c DNA,并重组到p Blueselect T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的c DNA为bcl-2和Bax,其c DNA分别包含由160bp和134bp。

摘要：目的探讨中药逆转胶囊对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR细胞bcl-2基因表达的影响从而进一步了解其逆转耐药的作用机制。方法用逆转胶囊含药血清培养MCF-7/ADR细胞,同时设计实验分组,以流式细胞仪计数方法检测各组MCF-7/ADR细胞的bcl-2基因的表达情况。结果逆转胶囊含药血清能显著抑制MCF-7/ADR细胞bcl-2基因的表达;与阿霉素合用时亦可抑制MCF-7/ADR细胞bcl-2基因的表达,加强ADM诱导凋亡的作用。结论逆转胶囊具有逆转MCF-7/ADR多药耐药性的作用,其机制之一可能是通过下调bcl-2基因表达来实现的。

摘要：为扩增蒙古绵羊bcl-2基因全序列,根据Gen Bank上已公布的牛的序列,设计了3条引物。从蒙古绵羊脾中提取总RNA,采用RT-PCR,技术扩增出bcl-2的c DNA,并重组到p Blueselect T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的c DNA为bcl-2,因为该c DNA包含由687个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码229个氨基酸。经比对,与牛的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别为95.5%和93.4%。

摘要：为扩增蒙古绵羊bcl-2基因3’端,根据GenBank上已公布的牛的序列,设计了2条引物。从蒙古绵羊脾中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出bcl-2的cDNA,并重组到PMD18-T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的cDNA为bcl-2,因为该cDNA包含由261个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码83个氨基酸。经比对,与牛的核苷酸序列的同源性为95.8%。

摘要：目的　通过计算机模拟bcl 2基因的mRNA二级结构 ,优化反义药物设计。方法　用计算机程序Mfold软件模拟mRNA的二级结构后 ,筛选出不稳定的二级结构区域 ,进行反义药物设计 ;用实验评价所设计反义药物的生物效应 ,筛选出的bcl 2反义寡核苷酸对白血病细胞株HL 60、K5 62生物学活性的影响。结果　有 2个位点的反义寡核苷酸在计量为 10 μmol·L-1以上时 ,能明显抑制细胞的生长活性。结论　bcl

摘要：目的探讨bcl-2siRNA和10．羟基喜树碱（HCPT）联合对小鼠H22肝癌移植瘤的治疗作用。方法设计并合成针对bcl-2mRNA序列的siRNA，将bcl-2siRNA转染人小鼠H22肝癌移植瘤内并联合HCPT治疗，观察肿瘤体积和小鼠体重的变化以及小鼠的生存情况。对肿瘤组织进行石蜡切片，采用HE染色观察移植瘤组织的形态变化。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测移植瘤组织中bcl-2mRNA的表达。采用流式细胞术检测移植瘤组织中H22细胞的细胞周期和凋亡变化。结果用药21d后，siRNA干扰联合HCPT治疗组H22荷瘤小鼠的肿瘤体积为（571．47±67．31）mm3，明显小于HCPT治疗组[（880．47±107．31）mm3，P〈0．05]、siRNA干扰组[（1119．55±158．60）mm3，P〈0．01]和生理盐水组[（1357．64±197．92）mm3，P〈0．01]。siRNA干扰联合HCPT治疗组小鼠的生存时间为26d，明显长于HCPT治疗组（14d，P〈0．05）、siRNA干扰组（21d，P〈0．05）和生理盐水组（12d，P〈0．05）。siRNA干扰联合HCPT治疗组移植瘤组织中H22细胞坏死明显，bcl-2mRNA表达下调，s期细胞比例减少，凋亡率升高。结论与单一治疗组比较，bcl-2siRNA与HCPT联合对小鼠H22肝癌移植瘤的生长有明显的抑制作用，并可延长小鼠的生存时间。