摘要：目的设计和克隆所有EB病毒(EBV)已知和预计的编码基因作为cdna探针用于构建EBV微阵列,以促进研究EBV在其相关疾病中的发病学作用.方法cdna探针首先由Oligo6.0,Blast和Primer Primier软件设计和筛选全 EBV基因组探针,它们的长度被定在300～600 mer并且具有高度特异性.从B95-8细胞和NPC组织的基因组DNA和 RNA中,通过PCR和RT-PCR方法扩增这些探针,之后克隆入T/A克隆载体.所有的探针被测序鉴定.结果除LF1和LF3基因在B95-8细胞的EBV基因组中不存在外,其余85个基因片段(BWRFl基因有7个重复阅读框架)和两个EBERs基因被成功克隆.结论EBV cdna探针的设计和克隆为制备EBV微阵列和进一步研究EBV基因组在其相关疾病中的作用奠定了基础.

摘要：根据已发表的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计特异引物,分别以提取的TMV、CMV和PVY侵染的病叶总RNA为模板,反转录PCR进行体外扩增,分别得到长度为0.44、0.77、0.80 kb的目的片段,并克隆到pGEM-T easy质粒载体上,以构建的重组质粒为模板,用PCR方法合成了相应的地高辛标记的双链DNA探针。以合成的探针通过斑点杂交技术检测烟草病叶总RNA和烟草病叶汁液。TMV、CMV和PVY的3种地高辛探针检测各自感染的烟草病叶总RNA的稀释低限分别为1:1 000、1:10 000、1:320,检测各自侵染烟草病汁液的最大稀释倍数分别为1:100、1:100、1:10,而每种探针与健康烟草和其它2种病毒的反应均为阴性。

摘要：目的 :构建大鼠钠尿肽 B受体 c DNA探针克隆载体 ,为研究该受体基因表达奠定基础。方法 :设计钠尿肽 B受体特异的 PCR引物 ,提取大鼠肺组织总 RNA,进行反转录 PCR,扩增目的片段 ,回收目的片段 ,将其克隆入p GEM- T载体 ,酶切鉴定并用双脱氧法测序。结果 :PCR反应产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定与所设计引物大小一致 ,克隆入 p GEM- T载体后酶切可切出所需片段 ,测序证实为所设计序列。结论 :构建的 p GEM- T重组质粒为进一步研究该受体基因表达。

摘要：根据ALV_J原型株HPRS10 3株gp85基因的内部序列 ,和pol基因的 3′端设计一对引物H5 H7。从发生ML病死蛋用型鸡的肿瘤、骨髓、肝脏、脾脏和输卵管组织中提取总RNA ,反转录为cdna ,经PCR扩增得到长度为 5 4 5bp的ALV_Jcdna特异性探针。探针定位于 5 2 5 8～ 5 80 2bp。将病鸡的组织石蜡切片置HybaidExpress原位PCR仪平台上 ,以H5 H7为引物进行原位PCR扩增。应用地高辛标记的cdna探针对原位PCR扩增后切片进行了原位杂交检测。结果在待检组织肿瘤组织、十二指肠、骨髓中出现明显的阳性信号。睾丸、肺、胰腺、大脑、输卵管、肾脏均检出散在的阳性信号。这是国内外首次从分子水平证明蛋鸡J亚群禽白血病。

摘要：利用自行设计的方法分离提取总RNA,通过一对特异引物,分别扩增出不同梨树品种上苹果锈果类病毒的特异片段,通过对库尔勒香梨品种上获得的特异片段回收、克隆和测序。结果表明,该片段长250bp,与已发表的AF421195同源性为99%,在此基础上利用克隆的ASSVd质粒,通过RT-PCR合成了生物素标记的cdna探针,利用该探针对梨样品进行了斑点杂交检测,取得了很好的检测效果。进一步证明该反应体系能很好地用于梨树苹果锈果类病毒的RT-PCR检测。

摘要：以光敏生物素标记的R3 cdna克隆为模型,采用正交设计的方法,对影响核酸杂交反应的主要因素:杂交反应温度,反应时间,探针浓度及甲酰胺浓度作了综合性分析。当探针浓度为800μg/L,甲酰胺浓度为10mol/L,50℃杂交反应6h,可获得最高灵敏度(10pg)。

摘要：利用自行设计的方法分离提取总RNA,通过一对特异引物,分别扩增出不同梨树品种上苹果锈果类病毒(ASSVd)的特异片段,经由回收、克隆和测序,有10条序列已在GenBank(EU031467-EU031476)登录,利用克隆的ASSVd质粒,通过RT-PCR合成了生物素标记的cdna探针,建立了斑点杂交检测技术。在此基础上以已知带有苹果锈果类病毒的库尔勒香梨和无类病毒梨树叶片为材料,利用DIG标记,研究了梨树类病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括SuperScriptⅡ浓度、4种碱基混合物(dNTPs)、RNA酶抑制剂(RNasin)及互补引物浓度对cdna合成的影响,退火温度、LA Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。研究结果表明:RNasin的用量大于0.2U/μL时,信号强度随着RNasin量的加大而增强;只有当dNTPs浓度达0.4mmol/L时才能生成一定量的cdna;SuperScriptⅡ浓度在0.5￣1.3U/μL均可进行正常的逆转录,而且在该范围内产物的量随SuperScriptⅡ浓度提高而增多;引物浓度达到0.9μmol/L以上时才能进行有效的逆转录,并且生成的cdna的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ASSVd的cdna适合退火温度为62℃。循环30￣35次可出现较强的蓝色信号,引物浓度在0.8￣1.2μmol/L时显色较好;LA Taq酶浓度为0.004U/μL以上,均显示较深的蓝色;Mg2+浓度为1.5mmol/L就可满足原位PCR所需。

摘要：生物体如何应对环境压力而增强其适应力？一些特别的基因反应已经被研究，还有一些正在研究的过程中，但是从整个生物体的层面上，特别是一些复杂的、多组织的生物，我们仍然缺乏足够的认识。因此，文章以鲤鱼经历极端环境压力为例，运用芯片分析技术探讨冷处理后基本的变化机制。文章的芯片共设计了13440个cdna探针，试验用的鲤鱼经历了逐渐增加的冷伤害水平，其取7个器官进行研究。