摘要：目的　寻找人子宫肌层诱导型环加氧酶 (cyclooxygenase 2 ,COX 2 )选择性剪接变异体。方法　运用自行设计的COX 2mRNA引物 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,分离临产与未临产产妇子宫肌层COX 2mRNA ,再对电泳所获条带进行亚克隆、测序。结果　未临产产妇子宫肌层未检测到COX 2mRNA ,临产产妇子宫肌层不仅检测到COX 2mRNA ,而且分离出一新条带 ,经亚克隆及测序 ,证实该条带系人子宫肌层COX 2蛋白DNA的第 7、8外显子间的内含子序列被保留所致。结论　临产产妇子宫肌层COX 2mRNA存在选择性剪接变异体。该变异体的发现 。

摘要：根据在GenBank中登录的番茄、胡萝卜和柑桔等酸性转化酶基因的保守序列设计引物 ,采用RT -PCR方法 ,从甜瓜果实总RNA中扩增出目标cdna片段 ,克隆到pMD18 T载体中。序列分析表明 ,它与其它植物的酸性转化酶基因的同源性很高 ,与番茄氨基酸序列同源性为 99%,说明已经成功克隆到甜瓜果实酸性转化酶基因cdna片段 ,在GenBank中登记号AF490 42 5。

摘要：根据其他蟹类蜕皮抑制激素的氨基酸序列设计了简并引物,运用RT PCR和RACE技术,从中华绒螯蟹(E riocheirjaponicasinensis)成体的蜕皮间期眼柄中,克隆了1条长1145bp的cdna。该cdna编码60个氨基酸,包括942bp的3′端非翻译区。同源性分析结果表明,该cdna编码的氨基酸序列和其他蟹类蜕皮抑制激素有较高的一致性,最高的一致性为64%,将获得的序列命名为中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1基因(GenBank检索号:AY309062)。用Northern印迹分析的方法对处于各个发育阶段的胚胎及状幼体期该基因的表达进行了研究,结果表明,处于胚胎发育早期的卵裂期几乎没有检测到杂交信号,而胚胎发育的其他时期和状幼体期都检测到蜕皮抑制激素1基因的mRNA。中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1基因部分cdna序列的获得为进一步获得该基因的全长cdna、研究其功能及阐明中华螯蟹蜕皮的分子机制奠定了基础。

摘要：利用昆虫酚氧化酶原 (PPO)基因序列设计简并引物 ,采用RT PCR方法从亚洲玉米螟幼虫体内扩增了一段 5 2 2个核苷酸的cdna片段 ,编码 174个氨基酸。经Blastp分析表明 ,该段氨基酸序列同鳞翅目和双翅目中PPO的相同区域具有较高的相似性 ( 39%～ 6 3% )。其中与烟草天蛾PPO的相似性最高 ( 6 3% ) ;与家蚕、大蜡螟、惜古比天蚕蛾PPO也有较高的相似性。在该片段中含有 1个该类酶原中保守的 2个铜离子结合位点之一 (含 4个组氨酸残基 )。据此推断克隆的片段为PPO基因片段。

摘要：根据GenBank中已登录的多种植物的蔗糖磷酸合成酶基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR方法,从枇杷果实中扩增出该基因的cdna片段并测序,分别为386 bp和383 bp。序列分析表明,枇杷果实蔗糖磷酸合成酶基因与桃果实蔗糖磷酸合成酶基因相似性达91%。半定量RT-PCR分析表明,该基因在枇杷果实生长发育过程中的表达量逐渐增加。所得基因片段已在GenBank中注册,386 bp和383 bp登记号分别为HM122759和HM146926。

摘要：目的克隆贵阳腐霉、Pr2蛋白酶的cdna片段,改造贵阳腐霉基因。方法用几丁质诱导培养基培养贵阳腐霉24 h,然后抽提菌丝的总RNA,反转录合成cdna第1链,根据Pr2蛋白酶的氨基酸保守序列设计合成简并引物,以cdna第1链为模板,采用降落PCR技术扩增,将扩增的产物纯化、连入pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,送阳性克隆子测序。结果所获片段中,1个215 bp的cdna片段与trypsin样蛋白酶家族基因有较高的相似性,其中与亚洲玉米螟的类胰蛋白酶基因相似性最大(52.8%)。结论这一DNA片段可能是贵阳腐霉Pr2蛋白酶的1条cdna片段,更进一步的工作是设法获得全长cdna片段,并加以证实。

摘要：目的 :从鲨鱼肝脏中分离纯化肝刺激物质 ,测定N 端氨基酸残基序列 ,根据序列分析结果 ,合成简并引物 ,获得鲨鱼肝刺激物质的cdna序列 ,并对其进行序列分析 ,比较其与已报道序列的同源性。方法与结果 :通过离子交换和凝胶过滤层析方法 ,从鲨鱼再生肝组织中分离到一种可刺激肝癌细胞株SMMC 772 1增殖活性的多肽 ,命名为鲨鱼肝刺激物质 (sHSS)。进一步通过FPLCMonoQ柱纯化后 ,纯度可达 95 %以上 ,其得率为 4 0mg/kg肝脏 ,SDS PAGE分析表明 :sHSS的分子量约为 1 6 0 0 0Da。对sHSS的氨基酸组分及N 端氨基酸序列进行了分析 ,并根据其N 端氨基酸残基序列设计了一套简并引物 ,利用RT PCR方法从再生肝组织的总RNA中扩增到一大小为 5 0 4bp的cdna片段 ,序列分析表明其与我们分离到的天然鲨肝刺激物质有一定的差异 ,而与已报道的肝再生增强因子 (ALR)差异较大 ,而与人、鼠以及果蝇中的一种未知功能的蛋白质在氨基酸水平上的同源性较高 ,分别为 84 % ,83%和 5 7% ,这类物质可能在生物机体中发挥重要的生理功能。结论 :通过RT PCR扩增 。

摘要：根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株(ATCC VR-2332)基因序列分别设计合成了针对PRRSV ORF3、ORF5和ORF6基因的引物,利用RT-PCR从广东省送检的5份病料中均分别扩增得到了大小约787、630和550 bp的片段,将扩增的cdna片段克隆入pMD 18-T载体并测序.应用DNAStar软件分析,并与国内外已发表毒株和疫苗株(RespPRRS/Repro、RespPRRS MLV)、LV4.2.1株的序列进行比较.结果显示,这5个毒株与CH-1a、HB-1(sh)、BJ-4、ATCC VR-2332、疫苗株等毒株ORF3、ORF5、ORF6的核苷酸同源性分别为87.2%～98.7%、85.4%～96.8%、91.8%～98.9%,推导的氨基酸同源性分别为84.6%～97.6%、84.5%～95.5%、94.8%～98.9%;而与LV4.2.1株的核苷酸同源性分别为56.1%～58.3%、54.4%～57.0%、62.2%～64.4%,推导的氨基酸同源性分别为53.9%～56.7%、54.0%～57.0%、78.0%～80.3%.基因系统发育树表明,广东省流行的PRRSV与HB-1(sh)株的亲缘关系比较近.

摘要：目的 :分离和纯化长白山白眉蝮蛇类凝血酶cdna片段 ,为克隆全长类凝血酶cdna奠定基础。方法 :应用RT -PCR方法获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cdna片段 ,克隆于pGEM T载体上 ,进行测序和NCBI数据库同源性分析。结果 :获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cdna片段长度为 2 89bp ,该片段与其他种蝮蛇类凝血酶DNA片段有同源性。结论 :本实验克隆了长白山白眉蝮蛇类凝血酶基因片段。根据不同种属蛋白质家族成员的保守性和同源性设计引物可以有效地克隆家族成员的DNA片段。

摘要：利用GenBank中猪肌生成抑制素(MSTN)编码序列设计引物,以湖北白猪背最长肌肌细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增出MSTN基因cdna片段。该片段全长1277bp,包含猪MSTN基因的全部编码序列。将所得片段与pUCm-T载体连接,转化到DH5α大肠杆菌中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒测序结果与文献报道的一致。