摘要：目的探索基于去活化CasMINI蛋白(dcasmini)的CRISPR干扰(CRISPRi)工具设计及其转录抑制效果评估。方法采用四环素诱导基因开启系统(tet-on),流式细胞测量术和实时荧光定量反转录聚合酶链反应从质粒基因、基因组外源性基因位点和内源性基因位点三个层次评估dcasmini系统在哺乳动物细胞中的转录抑制效果,并进一步设计和比较6种dcasmini-CRISPRi工具(dcasmini、dcasmini-ZIM3 KRAB、dcasmini-KRAB-MeCP2、dcasmini-ZNF324 KRAB、dcasmini-3x KRAB和dcasmini-Com-KRAB-MeCP2)和不同位置单链引导RNA(single guide RNA,sgRNA)的转录抑制效果。结果dcasmini、dcasmini-ZIM3 KRAB、dcasmini-KRAB-MeCP2、dcasmini-ZNF324 KRAB、dcasmini-3x KRAB和dcasmini-Com-KRAB-MeCP2能够不同程度地抑制质粒基因、基因组外源性基因的转录(P<0.05);dcasmini-ZIM3 KRAB、dcasmini-KRAB-MeCP2、dcasmini-ZNF324 KRAB和dcasmini-Com-KRAB-MeCP2能够不同程度地抑制内源性基因的转录(P<0.05);不同结合位点的sgRNA具有不同的转录抑制效果(P<0.05)。结论CasMINI系统能够改造成多种CRISPRi工具进行基因敲降研究,未来有望应用在多个场景,如原代细胞表观基因编辑、体内筛选和临床治疗等。