摘要：本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,结果表明所扩增2893个核苷酸片段含有CAEV囊膜基因的全序列,编码964个氨基酸。核苷酸和氨基酸序列分析显示,CAEV甘肃株env基因与CAEV-63美国株的env基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和98.1%。

摘要：为了解禽白血病病毒(ALV)贵州流行株的遗传变异情况及分子特征,本试验基于ALV env基因设计合成引物对禽白血病贵州临床病例进行目的基因扩增、克隆和序列分析。结果显示,从临床病例中筛选获得3份阳性样本,PCR扩增均获得大小约921 bp的目的基因片段,将其命名为:GZ-ALV-1株、GZ-ALV-2株和GZ-ALV-3株。序列分析结果显示,3株ALV贵州流行株之间核苷酸同源性在97.2%~97.6%之间,与国内外ALV-J的同源性相对较高,为93.1%~99.3%;而与A、B、C、D、E、K亚群ALV同源性仅为51.4%~53.2%。系统进化分析显示,3株ALV贵州流行株与ALV-J亚群参考株处于同一分支,表明本试验所检测的ALV毒株均为ALV-J亚群;与A、B、C、D、E、K亚群处于不同进化分支。基因变异分析显示,3株流行株37处相同核苷酸变异导致17处氨基酸发生位点变异,其中9个可变点在高变区hr1和hr2,1个可变点在低变区vr3。结果表明,3株ALV贵州流行株均为ALV-J亚群,env基因存在位点发生了变异,且可变位点位于序列高变区。本研究结果为明确贵州禽白血病流行概况及ALV的防控与净化提供基础数据。

摘要：为了解禽白血病病毒(ALV)在湖南省各禽类养殖场的感染情况,于2018年1月至2019年1月采集湖南省不同地区21个养殖场的156份组织与血清样品。分别设计针对ALV 5′非翻译区(5′UTR)的检测引物和env基因近全长扩增引物,通过RT-PCR首先用检测引物对样品进行检测,然后扩增阳性样品ALV env基因全长并测序分析。结果显示,19个养殖场检测出E亚群ALV(ALV-E),其env基因与GenBank中ALV-E的核苷酸序列同源性为99.38%~99.90%;1个养殖场检测出ALV-J,其env基因推导的氨基酸序列与GenBank中ALV-J的氨基酸序列同源性最高为92.63%,并且在该场同一样品中同时检出ALV-E和ALV-J;1个野鸡养殖场检测出ALV-F,其env基因推导的氨基酸序列与已发表的ALV-F的氨基酸同源性为88.69%;同时检测出2株新型的ALV,其env基因推导的氨基酸序列与已发表的A、B、C、D、E、F、J和K亚群的氨基酸同源性为44.68%~58.42%。结果表明,ALV-E在湖南省禽养殖场普遍存在,并首次在我国养殖野鸡中检测出ALV-F,而且在野鸡中发现了很可能是ALV新亚群的2株病毒。本试验为ALV在湖南禽类养殖场的流行情况研究提供了依据。

摘要：根据GenBank中绵羊肺腺瘤病毒(AF105220)env基因序列设计合成了1对引物。提取自然感染绵羊肺腺瘤病的羊肺组织总RNA,应用RT-PCR技术对env基因进行了扩增,将其回收后克隆入PMD19-T载体中并进行了序列测定。应用生物信息学分析技术并对env基因所编码的蛋白进行了结构预测。结果表明,env基因全长1 848bp,共编码615个氨基酸。在基因编码的TM区发现外源性exJSRV特异性的"YXXM"基序。测定序列与美国代表株(AF105220)的env基因序列比较核苷酸同源性为98.8%,推导出的氨基酸同源性为99.8%。通过protparam工具统计分析可知env基因所编码的蛋白为亲水蛋白。

摘要：根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)SNV株的前病毒基因组cDNA序列,设计并合成1对引物,以SNV株前病毒cDNA全基因组克隆为模板,通过PCR技术扩增出该病毒囊膜糖蛋白env基因部分片段。将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进pGEX-6P-1载体中谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的下游,将重组质粒转化进宿主菌BL21中,在1.0mmol/LIPTG(37℃)诱导下,env基因部分片段以融合蛋白的形式获得了良好的表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,确定其表达的融合蛋白相对分子质量为72kD,并经Western-blot检测,发现在72kd目标条带处呈现一棕红色印迹。

摘要：①目的　构建HIV 1SF2株env基因C1与C3区嵌合片段的克隆并在大肠杆菌中表达。②方法用DNAstar软件辅助设计引物 ,以含有HIV 1SF2株前病毒基因组的 9B1R6质粒为模板 ,PCR法分别扩增出env基因C1和C3段 ;两个片段经KpnⅠ酶切、T4连接酶连接和扩增后 ,再将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的嵌合片段插入表达载体 pGEX 4T 2中 ,构建重组表达质粒 pGEX 4T 2 /C1C3;重组质粒经酶切、测序鉴定后 ,以TSS法转入大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达融合蛋白和SDS PAGE电泳分析表达蛋白图谱。③结果　经酶切和测序分析 ,插入片段大小、方向和读码框架正确 ,无碱基错配 ,表明成功构建 pGEX 4T 2 /C1C3克隆 ;重组克隆在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导 ,高效表达出相对分子质量为 4 .3万的融合蛋白。④结论　重组质粒 pGEX 4T 2 /C1C3的构建和表达成功 ,为进一步研究该表达蛋白的活性和HIV疫苗的研制奠定了基础。

摘要：试验针对J亚群禽白血病病毒的env及LTR基因,根据它们的保守序列,分别设计合成了4～5对siRNA,并将其克隆至pSilencer 4.1,构建siRNA重组表达质粒。将该质粒转染DF-1细胞6 h后以103TCID50接种ALV-J,利用Real-time RT-PCR在mRNA表达水平检测各重组质粒对病毒复制的影响。结果表明,与阴性对照相比,pSi4.1-env各重组质粒对env基因的抑制效果达到18.15%～63.43%,pSi4.1-LTR各重组质粒的抑制效果则达到19.37%～45.41%。

摘要：为快速检测牛外周血淋巴细胞中的牛白血病病毒(bovine leukem ia vir,uBsLV)前病毒DNA,选取BLVenv基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立检测牛白血病前病毒DNA的荧光PCR方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价及实际样本的验证检测。结果显示,该方法具有很高的特异性和重复性,最低检出限为每个反应可检出3个拷贝数的阳性标准质粒对照。在175头BLV抗体阳性牛中,用该方法共检出127头BLV感染牛。在262头BLV抗体阴性牛中,用该方法检出2头BLV感染牛,该方法与套式PCR之间检测结果的符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的方法可用于BLV感染牛的确证。

摘要：为了解山羊鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)的流行情况,本研究针对ENTV-2的env基因设计了1对特异性引物与探针,通过RT-PCR条件优化,成功建立了ENTV-2荧光RT-qPCR检测方法。该方法特异性高、灵敏性强(5.61 copies/μL)、重复性好(CV为0.09%~1.20%)。本研究建立的一步法荧光RT-qPCR方法为ENTV-2的临床检测以及流行病学调查提供技术支撑。

摘要：本试验通过病理剖检、接种DF-1细胞、ELISA及RT-PCR检测,从北京某种鸡场的疑似禽白血病的父母代蛋鸡中分离到1株A亚群禽白血病病毒,命名为QC6281。并根据GenBank中已发表序列设计引物,扩增env基因片段并将其克隆到pMD19-T-simple载体中,扩增的env基因片段大小为1 239 bp,其中包括完整的gp 85基因,将gp 85基因亚克隆到pMD19-T-si mple载体中并测序,gp 85基因大小为1 032 bp,编码344个氨基酸。将env基因片段和推导的氨基酸序列与GenBank中9株ALV的env基因相应序列做同源性分析并制作进化树图谱。发现QC6281与已发表的A亚群禽白血病病毒株该区域核苷酸同源性在83.8%～98%,氨基酸同源性在86.9%～98.5%。其中与Myeloblastosis-associated virus type 1(L10922.1)同源性最高,核苷酸同源性为98%,氨基酸同源性为98.5%;且与Myeloblastosis-associated virus type 1(L10922.1)亲缘关系最近。本研究为该毒株的生物学特性以及致病性研究打下基础。