摘要：目的用RNA干扰(RNAi)技术抑制小鼠fas基因表达,观察其对脑微血管内皮细胞bEnd.3增殖及FADD-FLIP-TRAF-NF-κB信号传导途径的影响,为后续fasL低剂量兴奋效应研究提供实验基础。方法设计合成靶向小鼠fas基因的小干扰RNA(siRNA)片段,用脂质体包埋转染bEnd.3细胞;CCK-8法检测细胞增殖;RT-PCR检测bEnd.3细胞fas mRNA的表达情况;western blot检测fas、FADD、FLIP、TRAF蛋白表达水平。结果 CCK-8法检测显示,fas-siRNA组细胞增殖水平与空白对照组比较,无统计学差异(t=1.805,P>0.05);RT-PCR结果表明,与空白组的fas mRNA表达水平比较,fas-228-、fas-310-、fas-427-、fas-891-siRNA组mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(F=123.127,P<0.05);western blot显示,fas-siRNA组与空白对照组fas蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(t=12.101,P<0.01);fas-siRNA组FADD、FLIP、TRAF蛋白相对表达水平与空白对照组比较,表达均下调(t=28.315、17.563、8.903,P<0.05)。结论 fas-siRNA能有效封闭fas基因的表达,抑制fas下游信号FADD、FLIP、TRAF蛋白表达。

摘要：根据GenBank的羊fas细胞凋亡因子序列设计1对特异性引物,将EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点引入到引物两端,同时加上保护性碱基。利用RT-PCR技术,从新疆卡拉库尔羊外周血淋巴细胞总RNA中扩增出特异性基因片段。将分离纯化后的PCR产物与pMD-18T载体进行连接,利用双酶切反应与菌液PCR对阳性重组克隆进行鉴定筛选,然后进行序列测定。使用原核表达载体pET28a来完成fas的定向克隆,成功构建重组融合表达质粒pET-28a-fas,然后将质粒转化至*** BL21感受态,设置不同IPTG浓度和诱导温度,选择最佳的表达条件,然后初步纯化重组融合蛋白。结果表明,在pET28a表达载体中,fas基因的插入方向和读码框均正确;同时fas基因也完成在*** BL21融合表达的目的,融合蛋白分子质量为39.7ku。

摘要：目的研究猴艾滋病发病机制中细胞凋亡的作用，克隆凋亡相关基因Ｆａｓ的ｃＤＮＡ序列。方法从恒河猴腹股沟淋巴结中提取总ＲＮＡ，根据人的Ｆａｓ ｃＤＮＡ序列设计上、下游引物，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出目的ｃＤＮＡ片段，将这一片段克隆到ｐＧＦＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体中，筛选阳性克隆并进行序列测定。结果首次克隆了恒河猴Ｆａｓ基因，编码序列为１００５ ｂｐ，将其序列提交ＧｅｎＢａｎｋ，收录号为ＡＹ００７５７２。结论克隆的新序列与ＧｅｎＢａｎｋ已收录的人和食蟹猴的Ｆａｓ基因在编码序列的长度上稍有区别，人的编码序列为１００８ｂｐ，食蟹猴的为９９６ ｂｐ。

摘要：研究了ＣＤ３ε和ＰＭＡ对细胞凋亡基因ｆａｓ的转录调控作用．根据已知的人ｆａｓ基因５＇上游序列设计引物，用ＰＣＲ法从人胸腺细胞基因组ＤＮＡ中扩增出ｆａｓ５＇上游长为４４６ｂｐ的启动子片段．将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体ｐＸＰ２中．经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒ＤＮＡ的结构和序列正确．用此质粒（ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ）瞬时转染人ＪｕｒｋａｔＴ淋巴细胞，分析报告基因的表达水平．结果表明ｆａｓ基因上游－５０６到－６０的区域有弱启动子活性，约是阴性对照的１．５倍．抗ＣＤ３ε抗体和ＰＭＡ处理均可增强ｆａｓ启动子的活性，促进报告基因的表达，其虫荧光素酶活性分别是未经处理的ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ转染细胞的１．７倍和３．３倍，但二者没有协同作用．ＰＫＣ的抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和ＰＴＫ的抑制剂ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ可抑制ＰＭＡ诱导的ｆａｓ基因转录，使虫荧光素酶基因的表达降至未用ＰＭＡ处理的水平．但ＰＴＫ的另一种抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可与ＰＭＡ发挥协同作用，上调ｆａｓ基因的转录，使虫荧光素酶活性增加到５倍．这些结果为阐明ＣＤ３ε及ＰＭＡ介导Ｔ淋巴细胞激活和凋亡的分子机制?

摘要：目的　建立多重PCR -SSCP反应体系 ,以筛选瘢痕疙瘩fas基因突变。方法　按照多重PCR引物设计原则设计相应引物 ,经分析、实验得到理想的多重PCR扩增条件 ,以此条件扩增目的基因 ;将所得PCR反应产物在单基因对照下进行银染多重SSCP分析 ,进而筛选基因突变。结果　外显子 6 ,8,9的单一PCR反应产物及多重PCR反应产物经琼脂糖凝胶电泳 ,各条带清晰 ,无非特异性扩增 ,且产量较高 ,产物的长度与理论值相符 ;经银染多重SSCP分析 ,正常皮肤组织和增生性瘢痕中均未检出突变 ,在 2 3例瘢痕疙瘩标本中 ,18例出现异常电泳带。结论　本实验建立了用以分析瘢痕疙瘩fas基因突变的多重PCR -SSCP方法 ,分析结果提示 :瘢痕疙瘩组织中fas基因的突变可能与该病的发生有密切关系 ;多重PCR -SSCP是检测基因点突变的一种快速、敏感。

摘要：为了分析新疆卡拉库尔羊的fas基因,根据普通绵羊的碱基序列和相关文献设计引物,用RT-PCR扩增并测定了卡拉库尔羊fas基因的cDNA序列。结果表明,fas基因cDNA序列包含了一个750 bp的开放阅读框,通过GenBank中的Blastn序列比较分析,卡拉库尔羊的fas基因与普通绵羊的同源性高达99.69%。这为将来制备卡拉库尔羊fas基因探针及卡拉库尔羊分子免疫学的发展提供了理论依据。

摘要：为探究fas基因在贵州黑山羊各组织中的表达情况,试验参考山羊fas基因CDS区序列设计合成特异引物,利用PCR技术扩增贵州黑山羊fas基因CDS区序列并进行生物信息学分析,利用qRT-PCR检测fas基因在贵州黑山羊各组织中的表达量。结果:贵州黑山羊fas基因CDS区全长981 bp,编码326个氨基酸,分子式为C_(2958)H_(4937)N_(981)O_(1221)S_(195);其核苷酸序列与绵羊同源性最高,蛋白二级结构主要由α螺旋和无规则卷曲组成;fas基因在贵州黑山羊各组织中均有表达,表达量依次为脂肪>背最长肌>肺脏>大肠>脾脏>肾脏>腿肌>心脏>肝脏>小肠。结论:fas基因在贵州黑山羊脂肪组织中表达量最高,对贵州黑山羊脂肪形成具有重要调控作用。

摘要：试验以鸭为研究对象,构建DNA池,对fas基因第2外显子、第3外显子和跨第6、第7外显子设计引物,PCR结合直接测序技术,筛选与扩增产物存在的SNP位点。结果表明:fas基因第2外显子中检测到1个SNP位点(T729A),且引起天冬氨酸(GAT)转变为谷氨酸(GAA);mRNA二级结构最小自由能增加了133.76 k J/mol,α螺旋和延伸链含量和所占蛋白质二级结构比例增加0.53%和0.27%,而自由卷曲数量减少了0.80%,且蛋白质三级结构发生明显变化,有可能影响fas功能,从而对机体代谢产生影响。

摘要：根据GenBank的羊fas细胞凋亡因子序列设计1对特异性引物，将EcoRI和XhoⅠ酶切位点引入到引物两端，同时加上保护性碱基。利用RT—PCR技术，从新疆卡拉库尔羊外周血淋巴细胞总RNA中扩增出特异性基因片段。将分离纯化后的PCR产物与pMD-18T载体进行连接，

摘要：目的构建并鉴定人血型B抗原模拟多肽、巨噬细胞炎症蛋白3β(Mip3β)双表达重组质粒。方法抗血型B抗体筛选噬菌体随机12肽库,筛选阳性噬菌体克隆P1,设计特异性引物扩增P1噬菌体DNA,同样设计特异性引物扩增PBluscript-fas基因的跨膜区及胞内段,与P1酶切连接,最后与质粒PORF5-mMip3βv21扩增巨噬细胞炎症蛋白3β基因酶切连接,获得血型B抗原模拟多肽、Mip3β双表达重组质粒并进行鉴定,并在人黑色素瘤细胞株B16中转染与表达。结果和结论成功制备了血型B抗原模拟多肽、Mip3β双表达重组质粒,并在黑色素瘤细胞株B16中成功表达。