摘要：目的建立一种针对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)辅助耐药基因femb的实时荧光重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术检测方法,并评价其灵敏度、特异性以及实用性。方法针对femb特异基因设计RPA候选扩增引物以及RPA荧光探针,设置同一浓度的阳性质粒浓度筛选出最优的RPA扩增引物,建立SA的实时荧光RPA(exo-RPA)检测方法,并设置SA基因组DNA浓度梯度测试该检测方法的灵敏度;选用11种其他致病菌基因组DNA测试方法特异性。最后模拟临床血液样本比较该法与qPCR检测方法的阳性检出率,评价方法的实用性。结果SA-exo-RPA检测方法在39℃反应温度下,5~10 min内可快速检出最低浓度为1 amol/L(3.82 fg)的SA基因组DNA,且特异性高,与其他致病菌无交叉反应。模拟临床血液样本阳性检出率与已发表文献中qPCR检测方法一致,不受样本中复杂成分的非靶标核酸干扰。结论该研究建立的SA-exo-RPA检测方法具有快速、高灵敏度和高特异性的优点,可应用于SA的现场快速检测。