摘要：依据国外已发表的疱疹病毒（ＨＳＶ）糖蛋白Ｄ基因（ｇＤ基因）的核苷酸保守区序列设计了一对引物，建立了用疱疹病毒ｇＤ基因做疱疹病毒诊断基因的ＰＣＲ方法。对４８例拟诊为疱疹病毒感染的临床标本进行病毒细胞培养和ＰＣＲ检测。结果表明，ＰＣＲ对ＨＳＶ２感染的敏感性为８４％（２０／２４），特异性为９１％（２２／２４）。经标准株及限制性内切酶的酶切证实和序列分析，表明该方法特异。

摘要：参考GeneBank收录的伪狂犬病病毒gd基因的序列设计了一对引物,对PRVMin＿A株进行了PCR扩增,扩增产物克隆于pGEM＿TEasy载体。对重组质粒PGTE＿gd进行限制性内切酶分析和基因测序,证实了克隆片段的可靠性。测序结果表明目的片段包含一个1203bp的开放性阅读框(ORF),编码400个氨基酸组成的多肽。将gd基因亚克隆至真核表达载体pcDVA3.1＿的CMV启动子下游,构建了真核表达质粒pcDNA＿gd,为下一步基因免疫奠定了基础。

摘要：采集福州郊区病仔猪的鼻腔黏液、脑、脾脏、肾脏、淋巴结等组织病料,研磨上清接种到非洲绿猴肾(Vero)细胞和狗肾(MDCK)细胞进行病毒分离,通过对分离病毒株进行形态学、血清学、荧光抗体试验、动物接种试验、PCR试验等鉴定,确定所分离的病毒为猪伪狂犬病病毒(PRV),命名为PRV-FZ株.根据GenBank收录的PRV gd基因的序列设计一对引物,通过PCR方法扩增出约1579 bp的目的片段,并将其克隆到PCAGGS载体进行酶切鉴定、核苷酸序列测定和分析.结果表明,目的片段包含一个1203 bp的开放阅读框,编码400个氨基酸组成的多肽,与GenBank中有代表性的5株参考毒株相应基因序列比较显示,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.1%-99.8%和98.5%-99.5%.用Bioedit和TMPRED软件预测PRV-FZ gd基因的跨膜区,表明存在2处显著意义的跨膜区;用Predictprotein软件结构域预测,表明该蛋白存在2个cAMP-/cGMP-依赖蛋白激酶磷酸化位点、5个蛋白激酶C磷酸化位点、1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点及3对二硫键.

摘要：近年来,我国猪场内很多规模化猪场的伪狂犬病病毒野毒呈阳性,大部分中小规模猪场和小养殖场感染情况更为糟糕,使得伪狂犬病病毒的变异率增加,给该病的防控带来了更大的压力。为了深入了解本病的流行情况及研制新型疫苗用于该病的防治,本研究在流行病学调查的基础上从发生疑似伪狂犬病的2个猪场仔猪组织内各分离到1株PRV野毒株,分别命名为LY株和YSH株。参照已发表的PRV gE和gd基因序列,设计合成2对分别扩其全长的引物,使用高保真酶进行PCR扩增,将扩增得到的全长序列克隆到pEASY-Blunt载体中,并转化Trans1-T1感受态细胞,挑取阳性菌落的质粒进行酶切、测序鉴定,并与国内外其他毒株进行比较分析,构建遗传进化关系图。结果表明,2毒株与国内外其他毒株比较,gE、gd基因核苷酸序列的同源性分别为97.7%~100.0%和99.0%~100.0%;氨基酸序列的同源性分别为95.5%~100.0%和98.9%~100.0%,以gE、gd基因氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3~5年分离的PRVs形成一个相对独立的新分支。经过同源性及进化分析,可知新分离的2株伪狂犬病病毒株与欧美株的亲缘关系远,与亚洲株内中国株的亲缘关系近,初步判定属于国内流行株,并可能存在一定的抗原变异,这为进一步研究山东省猪群伪狂犬病病毒分子流行病学奠定了基础。

摘要：根据已发表的牛传染性鼻气管炎病毒(GenBank NC_001847)gd基因序列设计1对特异性引物,采用PCR方法扩增出内蒙古分离株gd基因的cDNA,重组到PMD19-T载体中,并进行克隆及序列测定。经限制性内切酶谱分析和序列分析,证明所克隆的cDNA为gd基因。该基因片段长1 559bp,包含1个由1 251bp组成的完整开放阅读框(ORF),共编码417个氨基酸。序列比较和系统进化树分析结果显示:内蒙古分离株gd基因与GenBank上已发表的其它分离株相比,核苷酸同源性在99.1%～99.9%之间,其推导的氨基酸同源性在90..6%～99.8%之间,在系统进化树中内蒙分离株与AJ004801株亲缘关系较近,属于同1个分支。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白具有亲水性,有很强的抗原性,有3个潜在糖基化位点,可能存在2个蛋白激酶C磷酸化位点,存在4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。

摘要：根据从虎气管组织扩增获得的猫传染性鼻气管炎病毒相关核酸序列,设计扩增编码虎源猫传染性鼻气管炎病毒gd蛋白基因片段的引物,通过PCR扩增出gd基因片段,并成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为18T-gd。重组质粒通过HindⅢ和XhoⅠ酶切后,插入pcDNA 3.1(+)真核表达载体构建出gd基因的重组真核表达质粒pcDNA-gd。用脂质体将重组真核表达质粒pcDNA-gd转染293T细胞,通过RT-PCR和Western blot检测,结果显示gd基因在真核细胞中得到正确转录和表达,所表达蛋白分子质量约为42.29ku,为虎源猫传染性鼻气管炎基因疫苗的研究奠定了基础。

摘要：为了解在贵州省开阳县某养鸡场分离的1株鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV贵州株)的遗传进化情况,试验设计、合成1对鸡传染性喉气管炎病毒gd基因引物,并通过扩增、克隆、测序该基因,分析其遗传进化情况。结果:PCR扩增基因为1134 bp。基因测序显示,ILTV贵州株与国内黑龙江、江苏、上海和国外澳大利亚、突尼斯、美国、意大利的9株ILTV分离株核苷酸序列同源性较高,均在98.9%~99.1%之间。遗传进化分析显示,其与美国株处于不同分支,亲缘关系较远;与另外8株处于同一分支,亲缘关较近。结论:ILTV贵州株gd基因遗传稳定,进化保守,未发生明显变异,可为防控疫苗选择提供依据。

摘要：根据GenBank上已发表的马疱疹病毒1型(EHV-1)和马疱疹病毒4型(EHV-4)gd基因序列,设计一对特异性引物。将扩增的EHV-1gd基因片段克隆至pET-30a表达载体,筛选获得重组质粒pET-30a-gd。经鉴定证明pET-30a-gd原核载体构建成功。将其转化入BL-21大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,并对培养时间、IPTG诱导浓度等培养条件进行优化,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示pET-30a-gd获得了高效融合表达,其表达的蛋白分子量约为29kD。Western blot分析结果表明,显示获得的融合蛋白与EHV-1/EHV-4阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性。

摘要：根据已发表的传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) SA-2株的核酸序列 ,设计了 1对引物 ,以 ILTV中国王岗株 DNA为模板 ,PCR法扩增出 1条 1 .3 9kb的基因片段 ,将扩增产物插入到真核表达质粒 p CRTM 3 -Uni,得到重组质粒 p TA-g D。另将克隆到 p Bluescript SK质粒中的 g C基因酶切后 ,插入到 p CRTM 3 -Uni载体 ,得到重组质粒 p TA-g C。经电泳分析、酶切、PCR鉴定后 ,进行序列测定。序列分析表明 ,ILTV王岗株 g C基因的编码序列与 SA-2株的核苷酸同一性为 99%,而王岗株 g D基因的编码序列在其 C端多了 1 7个核苷酸 ,其余部分的同一性为 97%。鉴于 g C、g D基因在诱导机体产生对 ILTV的免疫应答中的作用 ,g C、g D基因的克隆及其真核表达质粒的构建 ,为

摘要：根据已发表的PRVgd、gE基因序列 ,设计合成了两对引物 ,对猪伪狂犬病病毒XIN W株相关的毒力基因gd、gE序列进行测定和分析。经PCR扩增分别得到了全长为 12 0 9bp,1 743bp的gd、gE全基因序列 ,将它们克隆到pGEM T Easy载体中 ,并转化JM1 0 9,挑取阳性菌落的质粒进行PCR、酶切、测序鉴定 ,与其他参考毒株的gd、gE基因进行比较。结果表明 ,XIN W株与其它毒株相比 ,gd、gE基因核苷酸序列的同源性分别为 97.9%～99.3 % ,98.0 %～ 98.7% ;氨基酸序列的同源性分别为 97.0 %～ 99.3 % ,97.1 %～ 98.1 %。不同的PRV毒株间gd、gE基因在核苷酸水平和氨基酸水平高度保守。遗传进化树显示 ,XIN W株和国内其它毒株起源相同 。