摘要：为研制检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的试剂盒,对IBRV gd蛋白主要功能域的表达及免疫原性进行研究。根据NCBI数据库录入的1型牛疱疹病毒(bovine herpesvirus type 1)gd蛋白序列(Gen Bank登录号为NC_001847)设计引物,用PCR扩增gd基因类免疫球蛋白结构域,构建原核表达载体pET32a–Δg D,转化大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞,并诱导重组蛋白表达。经SDS–PAGE分析,获得了相对分子质量约43 000的目的蛋白,该蛋白的相对分子质量与gd融合蛋白的理论相对分子质量一致。经镍柱纯化后,重组蛋白的质量浓度为2.5 mg/m L,纯度约为95%,Western Blot及ELISA鉴定结果显示该重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,可用于IBRV抗体检测试剂盒的开发。

摘要：利用生物学软件分析牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gd蛋白的抗原决定簇,发现相应的核酸序列,设计特异性引物用PCR扩增IBRVgd基因片段并克隆到原核表达载体pET-32a中,通过双酶切鉴定正确和测序正确后进行诱导表达。利用间接ELISA方法和Western blot鉴定gd重组蛋白的免疫原性和反应原性。最后将gd重组蛋白用作包被抗原,并通过优化相应的反应条件建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示,表达的gd重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,间接ELISA阴阳性临界值为:D450nm值=0.23。重组抗原gd与口蹄疫、牛病毒性腹泻、赤羽病、副结核病、布鲁菌病、结核病等阳性血清无交叉反应,具有比较好的特异性。组内和组间变异系数均小于5%,重复性较好。建立的ELISA方法结果显示,当测试相同的200个临床血清样本时,与IDEXX牛传染性鼻气管炎病毒gB X3抗体检测试剂盒相比,两者符合率为96%。本试验为IBRV抗体间接ELISA检测试剂盒的开发奠定了基础。

摘要：根据GenBank马疱疹病毒1型(EHV-1)和4型(EHV-4)gd基因进行分析,选取同源性较高且抗原性强的C端序列设计一对引物进行扩增。将扩增的基因插入pET-30a的BamHⅠ和SalⅠ之间构建原核表达载体pET-gd。然后将pET-gd质粒转化至BL21(DE3)宿主菌,对培养和表达条件进行优化,实现EHV gd蛋白主要抗原区域的高效表达。将重组pET-gd蛋白进行纯化并接种长白兔制备高免血清。经免疫印迹试验鉴定,证实所得纯化表达产物具有良好的抗原性。

摘要：参照IBRV基因组序列,设计合成1对特异性引物,扩增了长约846bp的gd基因片段。将目的片段定向克隆到pET-30a原核表达载体,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导得到了以可溶性形式表达的重组蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性。本研究利用原核表达系统成功表达具有良好抗原性的gd蛋白,为IBRV的深入研究及诊断试剂的研制奠定了物质基础。

摘要：构建pET32a重组表达载体,转化到BL21(DE3),诱导表达牛传染性鼻气管炎病毒重组gd蛋白。用已发表的IBRV的gd基因序列设计一对特异性引物,通过PCR方法扩增一条766bp的目的基因gd,将gd基因克隆到原核表达载体pet32a,得到重组表达载体pet32-gd,转化到BL21(DE)中,通过IPTG诱导获得融合蛋白。重组表达蛋白经纯化后,免疫印迹分析。结论证明表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。

摘要：目的:建立一种快速、准确检测单纯疱疹病毒Ⅱ型D蛋白基因的方法。方法:根据已发表的gd蛋白核苷酸序列设计引物,采取降落PCR对gd蛋白DNA进行扩增。结果:从2份病毒株中均扩增出与预期大小完全一致的目的片段,并且采用降落PCR能有效地降低或避免非特异性扩增。结论:TD-PCR能够用于快速,准确地检测gd蛋白,为生殖器疱疹的鉴别诊断在分子水平上提供了理想的新方法。

摘要：目的:针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)包膜糖蛋白gd以及包膜糖蛋白gB的CTL表位,构建重组真核表达质粒pVAX-gd-CTL。方法:根据Gene Bank提供的HSV-2 G株糖蛋白D基因(gd)序列设计PCR引物,以已构建好的pc-gd为模板,特异性扩增HSV-2 gd片段,将其克隆于pVAX1载体中构建成质粒pVAX-gd,再将其双酶切后引入CTL片段构建重组真核表达质粒pVAX-gd-CTL。结果:将重组的pVAX-gd-CTL真核表达质粒转化大肠杆菌后,筛选阳性克隆进行酶切及测序鉴定。结论:初步构建HSV-2 pVAX-gd-CTL重组真核表达质粒。