摘要：建立准确鉴别猪群伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)野毒株和基因缺失疫苗株高效多重PCR方法,对PRV gG、ge和TK基因保守区域设计合成特异性引物,优化反应体系和条件,建立多重PCR鉴别检测方法,对临床样品进行检测应用。结果成功建立了鉴别PRV gG、ge和TK基因缺失疫苗株和野毒株感染的多重PCR检测方法,该方法对PRV gG、ge和TK基因可进行特异性扩增,对猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪副猪嗜血杆菌等相关病原均无扩增,对携带gG、ge和TK混合阳性质粒的最低检测限为2.5×10^(-5) ng/μL,具有良好的重复性。用该方法检测53份猪组织样品,检出PRV野毒感染的样品7份,与国标方法和单一PCR法检测结果符合率为100%。建立的猪伪狂犬病病毒野毒株和基因缺失疫苗株多重PCR鉴别检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,在生产中可快速、高效鉴别猪群PRV野毒感染和基因缺失疫苗免疫,可为PRV的快速鉴别检测、流行病学调查和防控提供技术支持。

摘要：参考genBank中伪狂犬病病毒(PRV)ge基因的序列设计了1对引物,对PRV粤A株ge基因进行了PCR扩增,PCR产物克隆到PMD18_T载体。对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,证实了克隆片段的可靠性,并与2株不同来源的毒株进行了同源性分析和比较。

摘要：根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)ge基因序列设计并合成1对引物,以烟台株为模板,用PCR法扩增出1条1.5 kb的基因片段,并将其克隆至pMD18-T载体中.经电泳分析、酶切鉴定,将得到的重组质粒命名为pMD-ge并进行序列测定.将测序结果与ILTV美国标准攻毒毒株和中国王岗株,BHV-1,EHV-1,FHV-1,HHV-2,HHV-3,HVT,MDV-1,MDV-2,PRV的ge基因比较,发现核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.7%～11.9%和99.4%～15%.结果表明,不同ILTV毒株之间ge基因还是比较保守的,但不同疱疹病毒之间,ge基因的同源性较低.

摘要：根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRVFa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1 7kb的特异片段,经酶切鉴定,初步确定为ge基因。将扩增产物经KpnⅠ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到了明显大于载体的重组质粒Ppge。重组质粒Ppge经酶切鉴定为含有PRV的ge基因,测序Ppge得到完整的ge基因片段,并与4株不同来源的毒株进行了比较分析。5毒株的ge同源性比较分析发现毒株间同源性最低也高达97%,这体现了ge基因的保守性。分析还表明Fa与TNL同源。同时99%的高同源性也显示Fa、Ea、SH可能是同一毒株。ge序列在1040-1410碱基的高同源性区域作为PRV的PCR检测或作为核酸探针是非常重要的。

摘要：根据已发表的伪狂犬病病毒 (PRV)Rice株的 ge基因序列设计了 1对引物 ,用PCR法特异性地扩增出了PRVMin A株的 ge基因 ,并克隆到 pUC19中 ,再与杆状病毒转座质粒pFastBac1连接得到 pFastBac ge ,pFastBac ge转化穿梭载体Bacmid ,得到了重组rBacmid

摘要：根据鸡传染性喉气管炎病毒 (AILTV)美国农业部 (USDA)标准毒株的基因序列 ,在AILTVge基因起始密码子上游和终止密码子下游设计了 1对引物 pAL1和 pAL2 。以AILTV王岗株DNA为模板 ,进行PCR扩增 ,得到约 1.5kb的片段 ,经酶切鉴定为AILTVge基因。将此PCR产物与pUC19质粒载体用限制性内切酶PstⅠ消化、连接 ,转化JM 83大肠埃希氏菌感受态细胞 ,用限制性内切酶酶切和PCR方法鉴定阳性重组质粒 pRHE。对其进行测序后 ,与AILTVUSDA标准攻毒株的ge基因序列进行比较 ,发现其核苷酸同源性为 99.5 % ,所编码氨基酸的同源性为 99.2 %。

摘要：参考genBank中伪狂犬病病毒 (PRV) ge基因的序列设计了 1对引物 ,对PRVMin A株进行了PCR扩增 ,扩增产物克隆于 pgeM TEasy载体。对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序 ,证实了克隆片段的可靠性。测序结果表明 ,目的片段包含 1个 174 0bp的开放性阅读框(ORF) ,编码由 5 79个氨基酸组成的多肽。同源性分析表明 ,PRVMin A株与PRVEa株、SH株ge基因的核苷酸同源性分别为 99.2 %、98.7% ;推导氨基酸的同源性分别为 98.6 %、97.2 %。

摘要：根据genBank中已发表的猪伪狂犬病病毒（PRV）ge、gI基因的序列设计了2对引物,对PRV NP株的ge、gI基因进行了PCR扩增、回收、克隆、测序,测序结果与预期的PRVge、gI基因片段相符。同源性比对分析结果显示,PRV NP株ge、gI基因推导的氨基酸序列与国内分离的PRV毒株的同源性分别为95.7%~99.8%、89.9%~99.5%。遗传进化树分析和氨基酸序列比对结果发现PRV NP株的ge氨基酸序列发生变化的位点与2012年国内分离到的PRV流行株相同,从而推测NP株为PRV变异毒株,本研究为PRV的流行病学调查分析奠定了基础,也为开发科学、有效的新型猪伪狂犬病（PR）疫苗提供科学依据。

摘要：根据伪狂犬病毒(PRV)NIA 3和Rice株的ge基因序列,设计了1对含有起始密码子和HindⅢ、BamHⅠ酶切位点的引物,以PRV粤A毒株(PRV YA)基因组为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增获得ge基因片段,将这一片段克隆至PMD18 T载体中,获得重组质粒PMD18 ge;用HindⅢ和BamHⅠ酶切该重组质粒,回收得到含有以上2个酶切位点粘端的ge基因,将此基因片段克隆至相同酶切、回收后的pcDNA3 1(+)真核表达载体中,获得真核表达重组质粒pcDNA3 1 ge,经PCR鉴定、限制性内切酶分析和克隆片段的序列测定、比较,证实了克隆片段的可靠性.

摘要：为建立一种能够鉴别伪狂犬病毒ge基因缺失疫苗毒与野毒套式PCR方法,根据genBank上发表的伪狂犬病毒gD、ge基因序列,设计并合成了4对引物,对反应体系和条件进行优化,建立复合套式PCR方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料中PRV检测对比等方法验证建立方法的适用性。结果表明,该方法检测的极限为2.78×10^(-4)pg/L,并且仅能从PRV野毒株扩增出354、217 bp目的条带,PRV疫苗扩增出了217bp单条带,其他5种常见感染猪的病毒均为阴性。