摘要：本研究旨在克隆山羊gata3(gata binding protein 3)基因,构建其真核表达载体,并对该基因进行生物信息学分析。以山羊gata3基因编码区为种子序列(GenBank登录号:XM_018056969.1),通过SnapGene 4.1.9软件设计引物序列,应用RT-PCR方法扩增山羊gata3基因完整编码区序列,测序鉴定后基于其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,并构建pLVX-gata3-IRES-ZsGreen1慢病毒重组质粒。利用脂质体转染方法将慢病毒重组质粒pLVX-gata3-IRES-ZsGreen1与病毒包膜质粒pCMV-VSVG、包装质粒pNRF共转染HEK-293T细胞,进行慢病毒包装后收集病毒上清液,成功感染山羊耳尖成纤维细胞。结果显示,山羊gata3基因编码区序列全长1335 bp,编码444个氨基酸,分子质量为47.94 ku,分子式为C2093H3234N626O625S24,等电点为9.47,其中丝氨酸含量最高(13.3%),色氨酸含量最低(1.1%)。山羊gata3基因核苷酸序列与牛、猪、驴、马、小鼠及人的相似性分别为97.7%、94.2%、92.2%、92.4%、88.0%和90.1%,不同物种间相似性较高,进化过程中具有高度保守性。系统进化树分析表明,山羊与牛、猪、驴、马及人聚为一支,亲缘关系较近,与非洲蟾蜍、斑马鱼亲缘关系较远。跨膜结构域及亲/疏水性预测结果显示,山羊gata3蛋白不存在跨膜结构域,为亲水性蛋白。信号肽预测结果表明,该蛋白定位于细胞质中。通过构建山羊gata3基因慢病毒真核表达载体pLVX-gata3-IRES-ZsGreen1,细胞水平上转染HEK-293T和山羊耳尖成纤维细胞,过表达gata3基因,产生绿色荧光信号。本研究结果为山羊gata3基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究gata3基因在山羊泌乳中的作用奠定了基础。

摘要：为了检测gata3基因在不同乳腺肿瘤组织中的相对表达情况,分析gata3基因表达与乳腺肿瘤不同临床特征的相关性.自主设计了gata3基因的引物和探针,建立检测gata3基因mRNA表达的一步法qRT-PCR检测方法,进而用建立的方法对130例临床乳腺肿瘤冰冻组织样本中gata3基因的mRNA表达进行检测,并分析gata3基因表达与乳腺肿瘤患者临床病理特征的关系.结果表明:gata3基因mRNA的相对表达量在瘤旁组织中显著高于肿瘤组织(9.1392E-02Vs5.0548E-02,p=0.0071),在良性纤维腺瘤中显著高于恶性肿瘤(6.87E-02Vs3.42E-02,p=0.002);在乳腺浸润性导管癌中,gata3基因的表达与ER表型和Luminal分子亚型显著正相关(rER表型=0.512***;r分型=0.459***);而在Luminal亚型乳腺癌样本中,gata3基因的表达与肿瘤TNM高、分化级别高显著负相关(rTNM分期=-0.111*,r分化=-0.147*).gata3基因异常低表达可能促进乳腺癌的发生、发展和转移,而gata3基因高表达的乳腺癌组织多伴随ER分子高表达,对内分泌药物相对敏感、预后较好.研究建立的gata3基因mRNA表达的一步法qRT-PCR检测方法可以为乳腺癌诊断和预后评估提供新的参考方法.