摘要：为建立检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)抗体间接ELISA方法,本实验根据已发表的ALV-J gp85基因序列设计一对特异性引物,以该病毒cDNA为模板进行PCR扩增,将目的基因克隆于pET-28a(+)载体中,原核表达的重组蛋白约为38 ku,经western blot分析表明,重组蛋白gp85具有良好的反应原性。以纯化的重组蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA抗体检测方法,该方法对其它相关的禽类病原无交叉反应,其组内和组间的变异系数均低于13%,具有良好的重复性。对458份临床血清样品进行检测,同时用IDEXX的同类ELISA抗体检测试剂盒进行对比,总符合率达到96.29%。本研究为ALV-J的流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。

摘要：本试验从湖北省分离到3株J亚群禽白血病病毒,并通过病理解剖、DF-1细胞培养和RT-PCR进行了鉴定,分别命名为HB1002、HB1003和HB1009。根据J亚群原型毒株HPRS-103序列设计引物,扩增gp85基因并测序。序列分析表明：基因片段大小均为921 bp,与预期一致;分离到的3株病毒之间核苷酸同源性在97.7%~99.7%,氨基酸同源性在95.1%~99.0%;与原型毒株HPRS-103核苷酸序列同源性在94.1%~94.8%;与其它ALV-J核苷酸同源性在87.6%~97.3%;进化树分析表明,分离到的3个毒株与JS09GY6同源性最近,在95.2%~97.3%。

摘要：本试验通过病理剖检、接种DF-1细胞、ELISA及RT-PCR检测,从北京某种鸡场的疑似禽白血病的父母代蛋鸡中分离到1株A亚群禽白血病病毒,命名为QC6281。并根据GenBank中已发表序列设计引物,扩增env基因片段并将其克隆到pMD19-T-simple载体中,扩增的env基因片段大小为1 239 bp,其中包括完整的gp 85基因,将gp 85基因亚克隆到pMD19-T-si mple载体中并测序,gp 85基因大小为1 032 bp,编码344个氨基酸。将env基因片段和推导的氨基酸序列与GenBank中9株ALV的env基因相应序列做同源性分析并制作进化树图谱。发现QC6281与已发表的A亚群禽白血病病毒株该区域核苷酸同源性在83.8%～98%,氨基酸同源性在86.9%～98.5%。其中与Myeloblastosis-associated virus type 1(L10922.1)同源性最高,核苷酸同源性为98%,氨基酸同源性为98.5%;且与Myeloblastosis-associated virus type 1(L10922.1)亲缘关系最近。本研究为该毒株的生物学特性以及致病性研究打下基础。

摘要：为了解禽白血病病毒(ALV)gp85基因的特点,采用Primer Premier 5.0设计一对特异性引物,对gp85基因进行扩增、克隆及序列测定,用相关生物学软件对贵州流行株gp85基因进行序列分析,并对其编码蛋白进行二级结构、B细胞表位、保守结构域、跨膜结构域和信号肽预测。测序获得921 bp长的序列,将此流行株命名为ALV-GZ-16。分析发现,流行株ALV-GZ-16的gp85基因核苷酸序列与J亚群中国分离毒株的gp85基因序列同源性为97.5%~99.9%,其编码的氨基酸序列与J亚群中国分离毒株的同源性为96.8%~99.7%;系统进化分析显示,该流行株与J亚群原型毒株处于同一分支,与贵州分离株GZN49处于同一小分支;其二级结构中无规则卷曲和β-折叠所占比例较大;预测此蛋白存在4个B细胞优势抗原表位,无跨膜结构和信号肽区域。研究结果进一步完善了贵州省禽白血病病毒流行株的生物学特性,为gp85蛋白特异性抗体的制备提供一定的理论基础。

摘要：构建J亚群禽白血病病毒gp85基因的原核表达载体,并在大肠埃希菌中获得表达。根据原核表达载体pET30的酶切图谱设计引物,以重组质粒pBS-T-env为模板,扩增gp85基因。将此段基因克隆到表达载体pET30上,转化大肠埃希菌BL21,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达出约为70ku的融合蛋白。获得了gp85基因的表达产物,为研制ALV-J的特异性抗血清及国内ALV-J病毒分子诊断试剂盒奠定了基础。

摘要：内蒙古某肉种鸡场 4 0周龄种鸡发生肿瘤性疾病 ,死淘率 15 % ;经病理组织学检查 ,增生的肿瘤为典型的髓细胞瘤 ,因此怀疑此病是 J亚群白血病。取病鸡肝电镜观察 ,在肝细胞胞浆膜下见有圆形的类病毒粒子存在 ;将肝病料处理后接种于鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,经电镜观察 ,可见正出芽的病毒粒子。为进一步确诊 ,以 AL V- J原型株 HPRS- 10 3囊膜 gp85基因为基础设计特异性引物 ,以感染的 CEF基因组 DNA为模板 ,体外扩增 (PCR) gp85基因 ,结果获得了92 4 bp的相应片段。将 PCR产物进行分子克隆和序列测定 ,结果表明 ,内蒙古地区 AL V- Jgp85蛋白的推测氨基酸与AL V- J原型株 HPRS- 10 3、山东 SD990 1株、美国 ADOL- R5 - 4株及内源性病毒 EAV- HP的 gp85蛋白的氨基酸同源性分别为 97.4 0 %、95 .13%、86 .6 9%和 85 .0 6 % ,其中与 HPRS- 10 3的同源性最高 ,与 EAV- HP同源性最低。因此可以确定本研究所克隆的基因为 AL V- Jgp85基因 ,暂命名为 AL V- J- NM876

摘要：运用实时荧光定量PCR技术,针对鸡J亚型白血病的gp85基因设计特异性引物,建立了一种快速准确诊断鸡J亚型白血病病毒(ALV-J)的荧光定量PT-PCR方法。通过重复性、特异性和灵敏度等验证表明,该方法适用于ALV-J的临床检测,为ALV-J引起的鸡肿瘤性疾病的快速诊断及采取相应的治疗措施提供了重要的技术支撑。

摘要：为了解贵州地方鸡群中禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)与马立克氏病毒(Marek’s disease virus,MDV)混合感染及其遗传进化情况,本研究通过对贵州威宁县某养殖场疑似禽白血病与马立克氏病混合感染的病例进行临床症状观察、解剖,并设计、合成J亚型ALV(ALV-J)gp85与MDV meq基因引物分别进行PCR检测,对扩增出的ALV-J gp85与MDV meq基因进行克隆与测序及序列分析。结果显示:临床发病鸡两腿呈劈叉状,剖检可见心脏等组织器官有肿瘤结节;ALV-J gp85与MDV meq基因的PCR扩增结果均为阳性,以上结果初步表明此病鸡属于ALV-J和MDV混合感染。对扩增出的ALV-J gp85基因进行DNA测序及序列分析,结果显示ALV-J gp85基因与ALV-J的核苷酸同源性为98.0%~99.7%,与ALV-J gp85参考毒株AHaq02核苷酸同源性高达99.7%,与ALV-J原型毒株HPRS103基因核苷酸同源性达到98.0%且位于同一分支上,与J亚群的其余参考毒株处于同一分支;MDV meq基因与超超强毒株型(vv^(+))的同源性为98.7%~99.8%,与MDV meq基因两株参考株GXY2、YLO40920同源性高达99.8%,MDV meq基因与毒力型为超超强毒株型(vv^(+))的参考毒株处于同一分支且与MDV m型、v型、vv型各代表毒株不在同一个分支上,故MDV meq基因可能属于vv^(+)型,可能为同一毒株型;以上结果进一步表明此病例为ALV-J与MDV混合感染,本研究将为肉蛋兼用型鸡ALV-J与MDV混合感染的疫情防控提供重要参考依据。