摘要：从小体鲟线粒体基因筛选出位于COI（细胞色素氧化酶）基因中的一段保守序列，针对其设计引物，优化SYBRgreen实时荧光PCR反应体系，建立了一种鉴定小体鲟的实时荧光PCR定性检测方法．该方法检测小体鲟DNA灵敏度为0．04mg／L．通过对采集和市售小体鲟鱼样品检测，该方法可检测出样品中的小体鲟成分．实验证明该方法可对血液样品和组织样品中的小体鲟进行种源鉴别．

摘要：参照GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT-1的保守序列设计1对引物,建立了牦牛多杀性巴氏杆菌实时荧光定量RQ-PCR检测方法。获得的标准曲线相关系数R值为0.9998,标准曲线的线性范围达到1.0×100～1×1010拷贝。对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和伤寒沙门菌等非巴氏杆菌进行检测,结果均为阴性。结果表明,本研究建立的荧光定量RQ-PCR方法敏感性高,特异性强,为青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌病的早期诊断及分子流行病学调查提供了一种新的快速检测方法。

摘要：结合焊接工艺的特点,确立由时间T、质量Q、成本C、资源消耗R、环境影响E五个方面构成的绿色性焊接工艺规划评价指标体系,并在此基础上,建立一种将熵权法、模糊评价法分别作用于评价过程中各个阶段的组合评价方法,该方法能较好地避免评价过程中的主观性和不确定性,最后通过实例验证该方法的科学性和可行性。

摘要：green Life绿色生活成就绿色生活的低碳科技可以是“高精尖”前沿技术在普通电器上的应用，也可以是隐含在日常生活中给人惊喜的巧妙创意，前者通过发展新的技术提高生活质量，而后者则是通过转变思维方式，如“四两拨千斤”一样扭转人们对低碳生活的态度。

摘要：为建立一种用SYBR green I荧光染料检测PK-15细胞α干扰素(α-IFN)效应因子Mx1、OAS的mRNA表达水平的qPCR检测方法,通过在猪圆环病毒2型(Porcine Circo-virus Type 2,PCV2)抑制α-IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。根据GenBank中目的基因的序列,利用分子生物学软件Premier 5.0在其保守区设计并合成相应的特异性引物。利用TRIzol法提取总RNA,经Oligo d(T)15进行反转录,利用PCR扩增各段目的基因,并克隆至pMD 18-T载体,转化大肠杆菌DH 5α,经鉴定为阳性的重组质粒作为标准品模板建立SYBR green I qPCR标准曲线和溶解曲线,并进行灵敏性、特异性和重复性试验。根据建立的实时qPCR方法,检测PCV2对α-IFN效应因子的抑制效果。对建立的PK-15细胞α-IFN效应因子SYBR green I qPCR方法进行分析,结果表明Mx1、OAS和内参β-actin基因的Ct值与标准品稀释度在1×101～1×108 copies/μL的范围分别呈良好的线性关系。PK-15细胞在接种PCV2,并受到α-IFN刺激后Mx1、OAS的相对表达量较未接种PCV2明显降低。本试验建立了PK-15细胞α-IFN效应因子的qPCR检测方法,为在mRNA水平上对PK-15细胞α-IFN效应因子的定量分析奠定了基础,并成功地初步应用于PCV2抑制α-IFN发挥效应的信号通路研究中。

摘要：目的:建立一种利用SYBR green I荧光PCR反应快速、准确、便捷检测副溶血性弧菌的方法。方法:根据副溶血性弧菌的H-NS基因的保守区域设计引物,利用副溶血性弧菌的标准菌株以及12株其他种属的常见致病菌对引物的特异性和灵敏度进行评价。基于该基因利用SYBR green I荧光PCR检测方法建立标准曲线,确定该检测方法的灵敏度。对用不同浓度的菌液污染的灭菌过的蚬子样品进行检测,确定该方法的的可行性。最后用该方法检测30份蚬子样品,并与国标GB4789.7-2013检测结果进行比较。结果:用H-NS基因作为靶基因检测副溶血性弧菌的SYBR green I荧光PCR检测方法,建立的标准曲线的相关系数为0.998,检测灵敏度为7.3×10 CFU/m L。人工污染蚬子的检出限为6.7×102CFU/m L。对蚬子样品的检测结果为30份样品中有4份含有副溶血性弧菌,与国家标准方法 (GB4789.7-2013)的检测结果具有一致性。结论:表明该方法可以用于副溶血性弧菌的快速检测。

摘要：目的建立一种自主研发的针对细菌16 S r DNA基因的实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法并评价该方法对浓缩血小板制品中细菌污染检测的效果。方法设计16S r DNA基因保守区引物,构建SYBR green Real-time PCR反应体系;然后分别将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和绿脓杆菌以初始浓度为1CFU/m L、10 CFU/m L和100 CFU/m L接种到浓缩血小板中,经22℃保存7 d后,用实时定量荧光PCR方法进行细菌检测。结果细菌污染后的血小板在常规保存条件下,最长保存期<7 d,不同接种浓度的细菌生长情况的变化趋势基本一致,所有种类的细菌均在d 1、2表现出迅猛的增殖高峰,d 3以后增殖趋于平缓。结论该Real-time PCR检测体系可定量地检测出血小板的细菌污染的情况,可适用于血小板输注前的快速细菌污染检测。

摘要：为快速灵敏检测核桃炭疽病病原菌,根据Gen Bank中炭疽属(Colletotrichum)不同种的ITS序列差异,设计了核桃炭疽病病原菌胶胞炭疽菌(C. gloeosporioides)的特异性引物YH1/YH2,并优化建立了检测核桃胶胞炭疽菌的SYBR green I实时荧光定量PCR检测体系。结果表明:该引物能从实验室分离保存鉴定的13株核桃胶胞炭疽菌中特异性扩增出306bp的目的条带,而对于其他6种核桃常见病害病原菌、健康核桃植株组织及所有微生物总基因组DNA均未扩增出特异性条带;建立的实时荧光定量PCR检测体系灵敏度为1×10-3mg·L-1,是常规PCR检测方法的100倍;对10份采集于四川、陕西、湖北等地的林间感病核桃植株组织进行定量检测,实时荧光定量PCR的阳性检出率为80%,且样品病症表现越明显检测到的含菌量越高。建立的SYBR green I实时荧光定量PCR检测方法可用于核桃感病组织内胶胞炭疽菌的分子鉴定和早期检测。

摘要：运用Sybr green I荧光定量RT-PCR方法和放射免疫方法(RIA)分析了外源性皮质醇(cortisol)对异育银鲫促甲状腺激素β亚基(TSH-β)mRNA表达和血清甲状腺激素水平的影响。实验设计为10周,实验组每两周注射一次0.2 mg/kg体重的cortisol(用57%酒精溶解),对照组注射同剂量的57%酒精。实验期间没有投喂饲料。在本实验条件下,研究结果显示:注射3次外源性cortisol后,异育银鲫TSH-βmRNA表达量与对照组相比略有下降;注射5次后,与对照组相比显著降低(P<0.05)。另一方面,RIA结果显示:注射3次外源性cortisol后,实验组与对照组相比,血清甲状腺激素T3和T4含量虽略有升高,但无显著差异;而注射5次后显著升高(P<0.05)。以上结果提示:外源性cortisol能够影响异育银鲫脑下垂体-甲状腺轴。

摘要：绿色建筑（Sustainable or green building）是建筑设计和施工的最新的,并将持久地影响本星球未来的趋势。绿色建筑的概念,包括促进节能、环境友好和可持续发展的建筑设计、施工和维修。绿色建筑选用适当的地点,利用绿色建材和最佳照明,并安装节能的设备。现代产品的复杂性使衡量其可持续性相当困难。