摘要：目的:利用SYBRgreenⅠ染料能与双链DNA结合发出荧光的特点,建立一种用来检测致病性蜡样芽孢杆菌(***)的实时PCR方法。方法:对致病性蜡样芽孢杆菌致病相关基因cereolysinAB基因序列进行分析,设计1对特异引物,通过对SYBRgreenⅠ实时PCR反应条件的优化,实现对致病性蜡样芽孢杆菌的检测。结果:该方法具有较强的灵敏性及特异性,能够对致病性蜡样芽孢杆菌进行有效检测,其最低检出限可达8CFU/mL。结论:利用该技术检测蜡样芽孢杆菌,较常规的生化检测方法具有省时省力的特点,且灵敏性较高,具有实际应用价值。

摘要：为探讨羊痘病毒感染后机体的凋亡细胞因子mRNA表达水平的变化,深入探讨羊痘病毒免疫机制,本研究设计针对羊凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1和TNF-α特异性引物,建立羊凋亡细胞因子实时荧光定量方法。分别建立荧光定量PCR反应体系并进行优化。结果表明:Fas、FasL、TNFR1和TNF-α的SYBR green Ⅰ实时荧光定量PCR各基因的溶解曲线均呈单一溶解峰。组内变异系数均小于2.00%。本研究建立的羊凋亡细胞因子SYBR green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法为凋亡细胞因子mRNA表达水平提供了技术平台。

摘要：以内源基因Lectin作为内参照,根据RR大豆中外源基因CP4-EPSPS和内源基因Lectin设计TaqMan和SYBR greenⅠ引物和荧光探针,使用定量PCR仪对大豆深加工产品中RR大豆的含量使用两种FQ-PCR方法进行定量检测,建立了RR大豆标准品CP4-EPSPS和Lectin之间的△Ct与样品中RR大豆含量百分比之间的校正曲线和线性回归方程,并对5种未知大豆深加工样品进行检测,同时比较二者的检测结果。结果表明,说明TaqMan和SYBR greenⅠ两种FQ-PCR检测技术的检测结果可靠,且均可用于转基因深加工产品的检测。

摘要：【目的】优化1种猪细环病毒2型(TTSu V2)的荧光定量PCR检测方法。【方法】对原有引物进行调整设计,以原有重组质粒为模板来重新进行检测TTSu V2 DNA的SYBR green I real-time PCR扩增。【结果】新的TTSu V2 SYBR green I荧光定量PCR的扩增效率为99.3%,标准曲线的决定系数为0.998,可准确检测的最低核酸模板浓度为50 copies/μL。与原方法相比较,新方法在熔解曲线、特异性、重复性方面都非常接近,但在扩增曲线方面得到明显改善,其可准确定量检测的灵敏度提高了至少10倍以上,临床检测数据也更加准确可靠。【结论】建立了一种新的准确灵敏度更高的定量检测TTSu V2的荧光定量PCR方法。

摘要：目的研究STAT6圈套寡核苷酸（ODN）对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠脾淋巴细胞转录IL-4mRNA的影响作用。方法实验细胞分组：空白组（A组）、哮喘OVA组（B组）、治疗哮喘OVA组（C组）、干扰哮喘OVA组（D组）、脂质体哮喘OVA组（E组）。设计并人工合成STAT6圈套ODN及无序ODN，全硫代修饰的ODN。用OVA和氢氧化铝复制哮喘模型，用淋巴细胞分离液分离小鼠脾淋巴细胞，体外培养后，导入由阳离子脂质体2000转染剂携带的圈套ODN进入淋巴细胞培养，抽提RNA进行反转录，建立实时荧光聚合酶链反应（PCR）反应条件，通过比较ct进行基因表达的相对定量分析。观察圈套ODN的转染对脾淋巴细胞转录IL-4mRNA的影响。结果A、B、C、D、E组的IL-4mRNA分别表达为：0．02545±0．00433，0．06742±0．00128，0．03151±0．00530，0．06504±0．00775，0．05952±0．00561。A组和C组低于B组、D组和E组，其差异有统计学意义（t=6．204，P〈0．01），C组和A组间差异无统计学意义（t=1．310，P〉0．05），B组和D组、E组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论熔解曲线分析结果证明了PCR反应的特异性，应用SYBRgreenI实时荧光PCR可以特异、准确地分析STAT6圈套0DN能下调STAT6活性，降低转录IL-4mRNA的表达。

摘要：[Objective] The study was to understand the subcellular localization of OsWRKY78 protein in plants. [Method] Primers specific for OsWRKY78 gene were designed according to the OsWRKY78 full length sequence in Genbank. The gene was cloned by RT-PCR method. The gene was then recombined into a plasmid expression vector carrying green fluorescent protein (GFP) gene, pBinGFP. The recombinant was confirmed by PCR and enzyme digestion. The recombinant plasmid pBinGFP-OsWRKY was transformed into Arabidopsis through Agrobacterium tumefaciens strain GV3101 and transgenic plants were obtained. [Result] Measured by fluorescence microscopy, the expression of OsWRKY78 and GFP fusion protein in root tip cells was localized in the nucleus. [Conclusion] This study laid the foundation for further investigating the function of OsWRKY78 gene and its role in related signal transduction and provided theoretical basis for exploring the relation between OsWRKY78 gene and brown planthoppers.

摘要：根据GenBank中的副猪嗜血杆菌(HPS)的infB基因的序列(DQ781808.1),利用分子生物学软件Premier 5.0设计一对特异性引物,建立基于SYBR green I荧光定量PCR检测HPS的技术。试验采用煮沸法从HPS培养物中提取DNA,进行PCR扩增。将鉴定正确的目的基因片段克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为阳性标准品。结果表明,该方法对HPS具有良好的特异性,不与其它猪源细菌发生交叉反应,其敏感性比常规PCR高100倍,而且非常稳定,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。临床应用表明本方法的建立实现了对HPS的快速诊断和定量的检测。

摘要：目的建立HIV-1DNA的实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测方法。方法根据HIV-1NL4-3LTR基因及人CCR5基因序列设计引物,构建质粒标准品,建立绝对定量检测方法,对检测方法的重复性和特异性进行评价。用该方法对20例HIV-1感染者HIV-1DNA进行定量检测。结果构建了HIV-1DNA绝对定量的标准品质粒,标准曲线的相关系数在0.99以上,重复性试验中变异系数小于3%,检测下限为1×103拷贝/μl。20例HIV-1感染者样品中,14例样品检测到HIV-1DNA,检出率为70%。结论 HIV-1DNA real-time PCR检测方法具有快速、特异性强和稳定性好等优点,为进一步研究HIV-1DNA与疾病进程的关系和评价抗病毒疗效等方面奠定了基础。

摘要：目的:建立检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中Akt,Raf,Hsp90,Hsp70基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株。当加入处理因素17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据Akt,Raf,Hsp90,Hsp70的基因序列,设计Akt1,Raf1,Hsp90,Hsp70的引物,利用ABI 7300PCR仪和SYBR green,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析。结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,17-AAG可以下调Akt及Raf基因的表达,上调Hsp90及Hsp70基因表达。结论:应用SYBR green实时荧光PCR可以特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件。

摘要：为了进一步支持在工程建设（AEC）行业的可持续设计和绿色建筑实践，国际设计软件巨头欧特克公司7月宣布了对Ecotect和green Building Studio资产的收购方案。通过此次资产收购，欧特克将进一步增强其在可持续设计领域的实力。通过提供覆盖全面的可持续设计和分析软件解决方案套件，凭借在建筑信息模型（BIM）流程中更加完善的建筑性能分析功能，