摘要：为快速检测和鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌,本研究设计并合成了空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因hipo和结肠弯曲杆菌cdtC基因的2对特异性引物,建立并优化了快速检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的双重PCR方法。结果显示,双重PCR对空肠弯曲杆菌hipo基因和结肠弯曲杆菌cdtC基因的扩增产物的大小分别为653bp和313bp。PCR扩增条件最终确定为退火温度为52℃,dNTP终浓度为0.4mmol/L,hipo和cdtC基因引物的终浓度均为2 5μmol/L。该双重PCR的灵敏度可达到6.6 8×1 0-2μg/mL,对多杀性巴氏杆菌、产单核细胞李氏杆菌、产气荚膜梭菌、伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌扩增均无目的条带,说明该PCR方法具有良好的灵敏性和特异性。符合试验结果与单一PCR方法结果相同。用所建立的方法对本实验室采集的鸡肛拭子划线培养后的可疑菌落进行PCR鉴定,结果显示2株为空肠弯曲杆菌,2株为结肠弯曲杆菌。结果表明,本研究建立的双重PCR可以用于同时检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌。

摘要：目的建立基于DNA环介导恒温核酸扩增法(LAMP)快速检测空肠弯曲杆菌。方法以空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因(hip O基因)为靶序列,设计6套特异性引物进行LAMP反应,通过比较扩增效率筛选出最佳引物用以快速检测空肠弯曲杆菌。对检测方法的特异性进行验证,敏感性与PCR法比较。结果实时浊度仪监测反应结果表明,LAMP反应在62℃恒温条件60 min内完成;如果在反应前添加钙黄绿素与氯化锰混合液(FD),黄绿色的阳性结果明显区别于橙色阴性结果。LAMP法最低检出限为6.97×10~2拷贝/μl,敏感性为PCR法(6.97×10~3拷贝/μl)的10倍。结论 LAMP法用于快速检测空肠弯曲杆菌具有检测过程简单、实验装置简便、反应结果判读方便、敏感性高、特异性强等特点,特别适于现场和基层检疫及医疗机构快速诊断。

摘要：目的:利用荧光定量PCR技术,建立食品中空肠弯曲菌污染的快速检测方法。方法:以空肠弯曲菌的hipo基因为靶序列,设计引物和探针,优化引物、探针浓度比和Mg2+浓度,对反应体系进行评价。并初步应用于样品的检测。结果:所建反应体系特异性、敏感性和稳定性良好。定量检测低限15cfu/ml。结论:建立了适用于食品中空肠弯曲菌污染快速检测的荧光定量PCR方法。