摘要：为了快速检测水生动物的嗜水气单胞菌(***)感染,本试验根据嗜水气单胞菌溶血素hlya基因序列设计引物,通过对退火温度和引物体积的优化,建立了嗜水气单胞菌的纳米聚合酶链式反应(Nano-PCR)检测方法,分析其敏感性、特异性和临床样本检测结果,并与普通聚合酶链式反应(PCR)方法进行比较。结果显示,优化建立的纳米PCR方法成功扩增出约280 bp的嗜水气单胞菌特异性条带;最小检测浓度为1.61 pg,敏感性是普通PCR(最小检测浓度为16.1 pg)的10倍;纳米PCR和普通PCR方法对创伤弧菌(***)、迟缓爱德华菌(***)和维氏气单胞菌(***)均无扩增;对18份病料的阳性检出率为72%,与普通PCR结果一致。结果表明,本试验建立的检测嗜水气单胞菌的纳米PCR方法较普通PCR方法具有更高的敏感性和特异性,为水生动物嗜水气单胞菌感染的鉴别诊断和防治提供了技术支持。

摘要：单增李斯特菌是一种可在低温下生长、能引起人畜共患病的食源性致病菌。为克服传统PCR检测的假阳性问题,有效的检测单增李斯特活菌,本研究提取单增李斯特菌的总RNA并进行反转录,以单增李斯特菌的必要毒力基因hlya为靶基因,设计特异性引物和TaqMan探针进行实时PCR检测,研究了检测的特异性和灵敏度,考查了对人工污染牛乳进行检测的应用性。结果表明,所用引物和探针能较好的扩增目的基因,而对其他食源性致病菌无交叉反应。单增李斯特菌经1h增菌,可检出3×102CFU/ml。而经3h增菌,活菌检测限可达30CFU/ml。人工污染牛乳样品经6h增菌,检测限为17CFU/ml。此方法可应用于乳中单增李斯特菌的快速检测和污染状况调查。

摘要：针对产志贺毒素大肠杆菌的stx2、wzy、hlya的保守序列,设计特异性的引物,建立一种新的多重PCR检验方法。结果显示,该方法特异性强,扩增结果与各参考菌株基因型一致,并能良好的区分出O157菌株和非O157型产志贺毒素大肠杆菌。该方法能用于食品样品的检测和流行病学分离株的快速鉴定。

摘要：目的:建立双重荧光PCR对单增李斯特菌(LMO)特异性检测同时检测其毒力基因的方法。方法:根据LMO溶血素基因hlya和內华素基因InlA的保守序列分别设计特异性引物和Taqman探针,优化多重荧光PCR反应体系,进行特异性、敏感性试验。结果:用建立的方法检测LMO标准菌株和24株分离株均出现hlya和InlA扩增曲线,而沙门菌等其他菌株未见扩增曲线;敏感性试验结果方法的敏感性达到2.5×102 cfu/ml。结论:本研究建立的LMO实时荧光PCR检测方法特异性好、灵敏度高,是快速检测LMO及其毒力基因的有效手段,可用于食品中LMO检测。

摘要：目的了解espP基因在中国部分地区产志贺毒素O157大肠埃希菌分离株中的分布情况及特点。方法根据O157∶H7的溶血素基因hlya和细胞外分泌蛋白基因espP设计特异性引物,对113株O157大肠埃希菌分离株进行PCR检测。结果 hlya的阳性率为99.1%,espP的阳性率为72.5%,且只在有大质粒pO157的菌株中检测到espP。结论 espP存在于携带pO157大质粒的O157∶H7大肠埃希菌中,其分布与菌株来源、志贺毒素携带情况等没有相关性。

摘要：目的:建立一种基于荧光探针重组酶介导等温核酸扩增(Recombinant Enzyme Mediated Isothermal Nucleic Acid Amplification,RAA)技术的快速检测食源性单增李斯特菌的方法。方法:针对单增李斯特菌hlya基因的保守序列设计特异性引物和探针,通过构建含hlya靶基因片段的重组质粒和不同浓度单增李斯特菌核酸,评价其灵敏度;通过检测大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌等菌液核酸,评价其特异性。结果:所建立的荧光RAA法可在39℃、20 min内完成样本核酸的检测。采用所建立的方法对质粒和核酸进行检测,质粒最低检出限为1 copy/μL,菌液核酸最低检测限为103 CFU·mL^(-1),且与其他菌株核酸无交叉反应。结论:成功建立了一种基于荧光RAA法的单增李斯特菌核酸检测方法,该方法具有特异性强和快速的特点,可用于疑似污染单增李斯特菌食品的快速检测。