摘要：为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后IL-6、inos基因的表达水平,从分子水平深入研究EMCV的致病机制,分别针对小鼠IL-6、inos及管家基因β-actin的基因序列设计特异性引物和探针,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-6、inos和β-actin的TaqMan rea-ltime PCR检测方法。该方法线性关系好,IL-6、inos和β-actin标准曲线的相关系数均达到0.998;敏感性高,初始模板的检出下限均达到1×101拷贝/μL;特异性强,只有以总RNA反转录成的cDNA为模板,并加入特异性引物和探针的反应才检测到荧光信号;重复性好,组内与组间的变异系数均小于2%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株感染小鼠的脑、心脏中IL-6、inos mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,本研究建立的TaqMan real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于小鼠IL-6、inos基因的检测及定量分析。

摘要：目的研究inos、NQO1在不同分子分型乳腺癌中的差异及临床参数间相关性,为乳腺癌临床治疗进行探讨。方法回顾性收集接受改良根治术的乳腺癌患者100例,免疫组织化学检测癌组织inos和NQO1表达情况。计数资料采用χ~2检验或Fisher确切概率法,Spearman相关分析分析临床分子病理特征之间的相关性。结果 NQO1表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移具有相关性(χ~2=6.603、4.938,P<0.05),HER-2过表达型中NQO1表达率高于luminal A型(χ~2=8.341,P<0.008)。inos表达与Ki-67表达、TNM分期及淋巴结转移情况相关(χ~2=5.243、8.157、5.929,P<0.05),luminal A型中inos表达率显著低于luminal B型(χ~2=7.990,P<0.008)。结论 NQO1和inos表达可能与乳腺癌的氧化应激过程有关,对促进乳腺癌进展有重要作用;不同分子分型乳腺癌之间的氧化应激水平可能不同,其具体分子机制需进一步设计实验研究。

摘要：试验旨在获得鲤鱼诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,inos)cDNA全长序列,并以此为基础探讨在丝裂原刺激下外周血白细胞中inos的表达变化。以从鲤鱼正常外周血白细胞cDNA文库中获得的inos的EST序列为基础,采用基因文库筛选和cDNA 5′末端快速扩增技术(5′-RACE)相结合的方法,成功扩增出鲤鱼inos cDNA全长序列,然后进行鲤鱼外周血白细胞原代培养,分成对照组和试验组,其中试验组分别为脂多糖(LPS,1.0μg/mL)刺激4、12h,刀豆蛋白A(ConA,1.0μg/mL)刺激4、24h,对照组为相同培养时间无丝裂原刺激的外周血白细胞,根据得到的inos cDNA全长序列和鲤鱼β-actin序列分别设计特异性引物,应用实时荧光定量PCR方法检测各组外周血白细胞中inos在mRNA水平上的表达情况并进行分析。序列分析结果显示,最后获得的cDNA片段共3 704bp,包含74bp的5′端非编码区,246bp的3′端非编码区,一个3 384bp的完整的开放阅读框(ORF),共编码1 127个氨基酸。序列同源性分析结果显示,该序列与鲫鱼inos基因同源性高达100%;实时荧光定量PCR结果显示,经LPS、ConA刺激的试验组外周血白细胞中inos表达量均升高,且短时间(4h)刺激的表达量高于长时间(LPS 12h;ConA 24h)刺激的表达量。综上所述,在LPS、ConA刺激过程中,inos在外周血白细胞中表达量均有上调,结果提示存在炎症反应的动态变化。