摘要：本研究探讨小分子RNA干扰技术抑制livin基因表达对白血病细胞系K562细胞凋亡的影响。设计合成livin特异性小干扰RNA(siRNA),核转染K562细胞,培养转染后的K562细胞,用RT-PCR检测livin mRNA的表达,Western blot检测livin蛋白的表达。以未转染细胞作对照,同时转染带有增强型绿色荧光蛋白的载体作为阳性对照,用流式细胞术检测其细胞绿色荧光以确定转染效率。用膜联蛋白Ⅴ及碘化丙锭双染法检测细胞凋亡率。结果表明,电穿孔的转染效率可达50%。siRNA既可以抑制livin mRNA表达,也可以抑制livin蛋白表达。特异性siRNA转染细胞后48 h细胞凋亡率为(27.41±2.30)%,与对照组(9.63±0.89%)比较明显提高(P<0.05)。结论:SiRNA可以抑制livin基因的表达,并能抑制livin基因的抗凋亡作用。

摘要：目的构建及鉴定livin基因siRNA慢病毒表达载体并观察其对喉癌细胞HEP-2增殖的影响。方法从基因库获得livin基因序列,设计3段siRNA序列;经MluⅠ和ClaⅠ双酶切后克隆入慢病毒表达载体p Len OR-THM,构建p Len OR-THMlivin-siRNA重组质粒,将其转化感受态细菌DH5α,对阳性克隆进行筛选后,用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切及测序鉴定正确后用脂质体转染293T细胞包装病毒颗粒,感染293T细胞及HEP-2细胞,用荧光定量PCR检测其对HEP-2增殖的影响。结果慢病毒表达载体p Len OR-THM-livin-siRNA被成功构建;转染293T细胞组装病毒液有绿色荧光,并主要表达在细胞膜上;浓缩后的病毒液感染293T细胞及HEP-2细胞均有绿色荧光表达。SH2-R组的livin蛋白相对表达量最低为(12.31±4.43)%;SH2-R组与SH2-F、NC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了livin基因siRNA慢病毒载体;HEP-2细胞livin蛋白表达受到抑制。

摘要：目的:观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默livin基因在胃癌BGC-823细胞中的表达,并探讨livin基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响.方法:自行设计两条针对livin基因的siRNA:livin-sh-1和livin-sh-2,以此构建相应的表达载体并分别转染至对数生长期胃癌BGC-823细胞,经G418筛选后分别采用半定量RT-PCR检测不同siRNA实验分组细胞BGC-823mRNA水平变化,四氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖、流式细胞仪检测胃癌细胞的凋亡.结果:siRNA对照组与空siRNA载体组livinα/βmRNA表达差别无显著性;但转染siRNA组livinα/βmRNA表达显著低于空白对照组和空siRNA载体组(livinα:0.11±0.07vs0.37±0.10,0.34±0.08;livinβ:0.13±0.04vs0.43±0.09,0.45±0.11,均P<0.05).空白对照组与空siRNA载体组相比,24、48、96h和1wk时细胞生长未受影响;而siRNA组在转染后24h和48h细胞生长未受影响,但在96h和1wk时则被明显抑制(P<0.01).转染siRNA组的细胞的凋亡率与空白对照组和转染空siRNA载体组相比显著增加(14.85%±1.35%vs4.51%±0.36%,6.13%±0.71%,均P<0.05).结论:siRNA沉默livin基因能抑制胃癌细胞的生长,促进胃癌细胞的凋亡,livin基因有可能成为胃癌治疗的新靶点.

摘要：目的:研究livin特异性小分子干扰RNA (siRNA)沉默胃癌SGC-7901细livin基因及对促胃癌细胞凋亡的影响。方法:设计针对人源livin基因的两条SiRNA:si-livin1和si-livin2,分别转染至对数生长期的胃癌SGC-7901细胞:逆转录酶链式反应(RT- PCR)检测转染前后胃癌SGC-7901细胞livin基因表达的变化,MTT法检测转染前后该细胞对5-FU、顺铂的半数抑制浓度(IC50)的变化以及检测转染前后细胞增殖能力的变化,PI染色后流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡的变化。结果:livin特异性siRNA转染胃癌SGC-7901细胞48h后,si-livin1组livinαmRNA(灰度值表示)表达较空白对照组和阴性对照组显著减少(livinα:0.167±0.013 vs 0.403±0.036,0.389±0.053;livinβ:0.181±0.028 vs 0.413±0.041,0.404±0.029,均尸<0.01),而si-livin2组livin mRNA表达相比于空白对照组和阴性对照无显著差异;转染siRNA后,si-livin1组胃癌细胞生长缓慢,生长曲线较对照组平缓;si-livin1组细胞对5-FU和顺铂半数抑制浓度IC50较空白对照组和阴性对照组显著降低(5-FU:34.07±2.98 vs 74.39±4.91,69.85±4.57;顺铂:4.56±0.35 vs 9.07±0.44,7.96±0.64,均P<0.01);转染siRNA后,si-livin1组胃癌细胞自发凋亡率较空白对照组和阴性对照组增加(11.07±1.36 vs 3.54±2.89,6.72±1.77,P<0.01,P<0.05).5-FU和顺铂作用后,si-livin1组胃癌细胞凋亡率较空白对照组和阴性对照组显著增加(5-FU:34.90±1.76 vs 11.54±O.83,13.54±2.55;顺铂:48.14±2.70 vs 14.51±0.35,15.71±0_34,均P<0.01).结论:RNA干扰可有效沉,livin基因表达从而抑制胃癌SGC-7901细胞生长及增加该细胞凋亡敏感性,livin可能成为胃癌凋亡治疗途径的一个分子靶点。

摘要：目的观察siRNA抑制livin基因在结肠癌细胞中的表达情况，探讨livin对结肠癌细胞生长、凋亡的影响。方法自行设计针对livin的两条siRNA表达载体并转染至生长期的结肠癌细胞中，筛选后采用RT—PCR、MTT、TUNEL分别比较检测转染前后结肠癌细胞livin的表达。结果siRNA对照组与空siRNA载体组的livincd[3mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）；但转染siRNA组livinl／2mRNA表达显著降低，明显低于siRNA对照组和空siRNA载体组（P〈0．05）。细胞生长曲线测定经F检验三组间无明显差异。转染siRNA载体沉默Livimx／[5表达，细胞凋亡率显著增加。结论siRNA沉默livin能抑制结肠癌细胞的表达及凋亡。

摘要：目的观察小分子干扰RNA（siRNA）沉默livin基因在食管癌细胞中的表达情况，探讨livin基因对食管癌细胞生长、凋亡的影响。方法自行设计两条针对livin基因的siRNA：livin—sh-1，livin—sh-2，构建相应的表达载体分别转染至对数生长期的食管癌，经G418筛选后采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、MTT、TUNEL分别比较检测转染前后食管癌细胞livin基因的表达。结果siRNA对照组与空siRNA载体组的livinw／β mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）；但转染siRNA组livinl／2mRNA表达显著降低，明显低于siRNA对照组和空siRNA载体组（P〈0．05）。细胞生长曲线测定经F检验三组间差异无统计学意义。转染siRNA载体沉默livina／β表达，细胞凋亡率显著增加。结论siRNA沉默livin基因能抑制食管癌细胞的生长，促进食管癌细胞的凋亡，livin基因有可能成为食管癌治疗的新靶点。

摘要：目的:观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默livin基因在结肠癌细胞中的表达情况,探讨livin基因对结肠癌细胞生长、凋亡的影响。方法:自行设计针对livin基因的两条siRNA表达载体并转染至生长期的结肠癌细胞中,筛选后采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、MTT、TUNEL分别比较检测转染前后结肠癌细胞livin基因的表达。结果:siRNA对照组与空siRNA载体组的livinα/βmRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);但转染siRNA组livin1/2mRNA表达显著降低,明显低于siRNA对照组和空siRNA载体组(P<0.05)。细胞生长曲线测定经F检验三组间无显著性差异。转染siRNA载体沉默livinα/β表达,细胞凋亡率显著增加。结论:siRNA沉默livin基因能抑制结肠癌细胞的生长,促进结肠癌细胞的凋亡。

摘要：目的探讨livinmRNA反义寡核苷酸(ASODN)对人白血病细胞(HL60)增殖及凋亡的影响。方法用免疫组织化学检测L ivin蛋白表达,设计合成特异性的livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),脂质体转染HL60细胞。用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)检测细胞增殖,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测livinmRNA的表达,原位末端标记技术(TUNEL)、电镜检测细胞凋亡率和形态学改变。结果livinASODN在终浓度为600 nmol/L作用HL60细胞48 h时,能明显地抑制其增殖,降低livinmRNA的表达,HL60细胞在形态学上出现明显的凋亡改变,细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论livinASODN可有效抑制HL60细胞的增殖,下调livin基因表达,并促进HL60细胞凋亡,在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖中发挥重要作用。

摘要：目的构建靶向livin基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,探讨其对肺癌A549细胞livin表达及细胞增殖的影响。方法培养人肺癌A549细胞株,分为实验组、质粒对照组及空白对照组。设计并构建靶向livin基因的shRNA真核表达载体pSD11-livin,以pSD11-livin载体转染实验组细胞,以p SD11-NON质粒转染质粒对照组细胞,空白对照组不行转染处理。采用荧光定量PCR法检测各组细胞livin mRNA的表达,Western blot法检测各组细胞livin蛋白表达,MTT法检测各组细胞生长抑制率。结果测序分析证实,针对livin基因的shRNA真核表达载体构建成功。转染后48 h,实验组、质粒对照组及空白对照组livin mRNA相对表达量分别为0.514±0.102、0.879±0.093及1.002±0.032,实验组livin mRNA相对表达量低于质粒对照组及空白对照组(P均<0.05)。转染后72 h,实验组、质粒对照组及空白对照组livin蛋白相对表达量分别为0.295±0.073、0.661±0.066及0.732±0.059,实验组livin蛋白相对表达量低于质粒对照组及空白对照组(P均<0.05)。实验组转染后不同时间的生长抑制率均高于质粒对照组及空白对照组(P均<0.05)。结论 livin shRNA真核表达载体构建成功,转染肺癌A549细胞后可抑制livin mRNA及蛋白的表达,抑制细胞的增殖。

摘要：目的构建针对livin基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,探讨其对肝肿瘤HepG2细胞化疗敏感性的影响。方法设计并构建针对livin基因的shRNA真核表达载体pSD11-U6/Neo/GFP/livin,脂质体法转染肝肿瘤HepG2细胞。荧光定量PCR、Western blotting检测细胞livin mRNA和蛋白的相对表达水平。顺铂(2.0 mg/L)处理后,MTT法检测细胞生长抑制率。结果测序分析证实针对livin基因的shRNA真核表达载体构建成功,转染肝肿瘤HepG2细胞后可降低livin mRNA和蛋白的相对表达量(P<0.05),顺铂对转染livin表达载体的HepG2细胞抑制率明显高于未转染细胞(P<0.05)。结论成功构建livin shRNA真核表达载体,且有效抑制HepG2细胞中livin基因的表达,增强肝肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。