摘要：目的构建靶向livin基因干扰真核表达质粒,建立干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞系,下调livin基因在Hep-2细胞系中的表达。方法针对livin基因的mRNA序列设计干扰序列,分别构建1个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒,大肠杆菌扩增、酶切及测序鉴定,用脂质体介导转染Hep-2细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞系,用Real-time PCR和Western blot检测livin在mRNA和蛋白水平的抑制效果。结果经测序证实成功构建pGenesil-livin shRNA真核表达质粒。干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞在荧光显微镜下观察,发出绿色荧光。重组质粒转染Hep-2细胞后,livin基因在mRNA及蛋白水平明显下降,mRNA水平下调47.17%,蛋白水平下调34.25%。结论成功构建以livin为靶向的livin shRNA真核表达质粒。对喉癌Hep-2细胞中livin的表达具有显著抑制效应,为研究livin在Hep-2中的功能和喉癌的基因治疗奠定了基础。

摘要：目的观察靶向抑制livin表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法取人子宫内膜癌Ishikawa细胞,将细胞分为livin-Si组、livin-NC组和空白对照组。设计合成livin的特异性小分子干扰RNA(livin-siRNA)和阴性对照序列(livin-NC),livin-Si组、livin-NC组分别采用脂质体法瞬时转染livin-siRNA干扰序列、livin-NC阴性对照序列,空白对照组加入10%FBS。转染后48 h,实时荧光定量PCR法检测livin mRNA表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞侵袭及迁移能力。结果 livin-Si组livin mRNA相对表达量较livin-NC组、空白对照组减少(P均<0.01)。livin-Si组细胞增殖OD值低于livin-NC组和空白对照组(P均<0.01)。与livin-NC组、空白对照组比较,livin-Si组穿膜细胞数均减少(P均﹤0.01)。结论抑制livin在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达,可抑制细胞的增殖,减弱细胞的侵袭及迁移能力。