摘要：目的：检测髓样细胞白血病-1基因（myeoidcellleukemin-1，mcl-1）在胃癌细胞SGC7901及MGC-803中的表达．并筛选出最有效的siRNA序列。方法：RT—PCR检测胃癌细胞中mcl-1基因的表达；设计针对mcl-1的4对干扰序列（mcl—lsiRNA1-4）及1对阴性对照（mcl—lsiRNANC）。瞬时转染胃癌细胞，荧光定量PCR和Westernblot分别检测转染24、48、72h后细胞中mcl-1含量。结果：2种胃癌细胞均存在mcl-1基因的表达。综合分析．SGC7901及MGC-803细胞转染48h后达到最佳抑制效果；以mcl-1siRNAl为最好，mcl-1mRNA的抑制率分别为73．8％、67．6％；蛋白抑制率分别为79.3％和96．1％。结论：本研究成功设计并筛选出能够同时有效抑制2种胃癌细胞mcl-1表达的siRNA1序列。

摘要：目的构建针对髓细胞白血病基因-1(mcl-1)的shRNA的重组质粒,探讨该重组质粒对肝癌细胞化疗敏感性的影响。方法设计3对针对mcl-1基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体psiRNA-hH1neo-mcl,用阳离子脂质体法将重组质粒转染至人肝癌细胞株HepG2中,采用RT-PCR和Western blot方法检测转染后mcl-1mRNA及蛋白表达情况,筛选mcl-1基因表达沉默效应最好的重组质粒。用MTT和流式细胞仪分别检测单独使用丝裂霉素(Mitomycin,MMC)、单独使用重组质粒以及联合使用重组质粒与MMC对HepG2细胞的增殖和凋亡的影响。结果成功构建含不同shRNA片段的重组质粒,依次命名为pmclsi-1、pmclsi-2、pmclsi-3。经测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致。重组质粒转染HepG2细胞后,mcl-1基因的mRNA水平及蛋白水平明显下调,其中以pmclsi-1下调效应最强。MTT检测显示,pmclsi-1联合化疗药物MMC对HepG2细胞增殖的抑制活性显著高于单用MMC组或单用pmclsi-1组,流式细胞仪检测显示,pmclsi-1联合化疗药物MMC促进HepG2细胞凋亡的活性显著高于单用MMC组或pmclsi-1组。结论针对mcl-1基因的siRNA可特异阻断mcl-1基因的表达,从而明显增强肝癌细胞对化疗药物MMC的敏感性。

摘要：本文构建了靶向mcl-l基因构建的特异性siRNA重组质粒,在细胞水平检测的其抑制效果,并筛选出能高效抑制mcl-l基因表达的siRNA重组质粒,针对mcl-1的特异性siRNA重组质粒,将其转染到人肝癌细胞HepG2,用Rt-PCR(实时荧光定量PCR)方法和WesternBlot方法分别检测转染前后mcl-1mRNA水平和mcl-1蛋白表达水平,比较对应不同位点的两个siRNA重组质粒对mcl-1的抑制效果。结果表明,Rt-PCR结果显示对应不同位点的两个siRNA重组质粒对mcl-1均可降低mcl-1mRNA水平,最大抑制效率达70.0%,远高于作为对照非相关组;Western-Blot结果显示转染特异性siRNA重组质粒后mcl-1蛋白表达受到抑制,最大抑制率为44.2%。合理设计的特异性siRNA重组质粒可大幅度下调mcl-1mRNA水平,能有效抑制mcl-1蛋白表达。

摘要：目的 研究miR-193b在子宫内膜癌组织中的表达,以及其与临床病理参数的关系,并探讨其对子宫内膜癌Ishikawa细胞紫杉醇化疗敏感性的影响。方法 检测68例子宫内膜癌组织中miR-193b的表达水平,以60例正常子宫内膜组织作为对照组,探讨其表达与子宫内膜癌临床病理资料的关系。设计miR-193bsiRNA及miR-193b利用脂质体2000转染入细胞内,并通过real-timePCR检测其转染效率,利用MTT法体外划痕实验验证miR-193b联合紫杉醇对肿瘤细胞的杀伤效力,利用生物信息学、real-time PCR和Western blot方法验证miR-193b是否调节子宫内膜癌细胞mcl-1的表达。构建mcl-1真核表达载体,MTT法和流式细胞术检测mcl-1表达载体转染对miR-193b联合紫杉醇治疗子宫内膜癌疗效的影响。结果 与正常子宫内膜组织相比较,miR-193b在子宫内膜癌组织中表达下调(P0.05)。miR-193b联合紫杉醇治疗组对子宫内膜癌细胞的杀伤效力显著高于紫杉醇单治疗组。miR-193b转染后,子宫内膜癌细胞mcl-1的mRNA及蛋白表达水平均下降。miR-193b联合紫杉醇在mcl-1表达载体转染后对子宫内膜癌细胞的杀伤活性显著低于未转染mcl-1表达载体的miR-193b联合紫杉醇治疗组。结论 miR-193b的表达与子宫内膜癌的发生发展、转移和侵袭能力密切相关,且miR-193b可通过靶向于mcl-1增强紫杉醇对子宫内膜癌细胞的杀伤效力。