摘要：AIM： To reverse the multidrug resistance （mdr） by RNA interference （RNAi）-mediated mdrI suppression in heparoma ***： For reversing mdr by RNAi technology, two different short hairpin RNAs （shRNAs） were designed and constructed into pGenSil-1 plasmid, respectively. They were then transfected into a highly adriarnycin-resistant HepG2 hepatorna cell line （HepG2/ADM）. The RNAi effect on mdr was evaluated by real-time PCR, cell cytotoxicity assay and rhodarnine 123 （Rh123） efflux assy. RESULTS： The stably-transfected clones showed various degrees of reversal of mdr phenotype. Surprisingly, the mdr phenotype was completely reversed in two transfected clones. CONCLUSION： mdr can be reversed by the shRNAmediated mdrI suppression in HepG2/ADM cells, which provides a valuable clue to make multidrug-resistant hepatoma cells sensitive to anti-cancer drugs.

摘要：目的:构建并鉴定mdr-1基因沉默载体pSUPER-retro-puro-shRNA(mdr1),并检测其对于乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR耐药表型的逆转效果。方法:根据mdr-1基因序列,利用在线软件IDTdna设计2个干扰mdr-1基因的寡聚核苷酸序列,合成回收DNA序列退火后克隆至线性化pSUPER质粒载体,重组质粒载体经双酶切电泳鉴定和测序分析后,再转染293T包装细胞产生病毒颗粒后感染MCF-7/ADR细胞。用RT-PCR检测mdr1基因mRNA表达,Westernblotting测定转染后MCF-7/ADR细胞中P-gp蛋白的表达量。结果:重组mdr基因沉默载体经双酶切电泳鉴定和DNA测序分析证实插入60bp序列与原序列一致,位置正确;与对照组比较,转入MCF-7/ADR细胞后RT-PCR结果显示mdrmRNA水平明显下降,Western blotting显示P-gp蛋白表达量明显降低。结论:逆转录病毒mdr1基因沉默载体构建成功,并在MCF-7/ADR细胞中起到抑制mdr1基因表达的作用。

摘要：目的建立一种比现有方法敏感、准确性高、重复性好的人类mdr1基因的新型实时荧光定量PCR检测新方法。方法用Primer Express 2．0引物设计软件设计引物和MGB探针,以Taq Man-MGB探针技术为基础,运用Taq Man-MGB探针,以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHamdr1／A为阳性模板,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果所建立方法的最低检测限度为15个基因拷贝／反应,在待扩增DNA浓度为3．06115;103 cps／ml-3．06115;109cps／ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,决定系数r2为0．988243。结论应用Taq Man-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确性高等优点。

摘要：目的采用RNA干扰技术逆转人卵巢癌OVCAR8/TR细胞中多药耐药基因,探讨该技术能否有效地抑制多药耐药基因mdr1的表达,降低该基因编码的糖蛋白P-gp的水平。方法设计合成针对mdr1的小片段RNA(siRNA),将合成的siRNA用脂质体转染具有多药耐药基因mdr1高表达的人卵巢癌泰素耐药细胞株OVCAR8/TR,用荧光定量RT-PCR检测转染后不同时间点mdr1的mRNA的变化,流式细胞仪定量测定转染后不同时间点P-gp表达的情况。结果mdr1的siRNA转染细胞48 h基因的抑制达最高,转染的第5 d回到正常水平。阴性对照组mRNA的量与未转染组的mRNA的量差异无统计学意义。P-gp在转染后的72 h其抑制最强,至第5 d时恢复接近正常水平,阴性对照组蛋白表达与未转染组的蛋白表达差异无统计学意义。结论siRNA能够有效地抑制多药耐药基因mdr1的mRNA和P-gp的表达,为逆转卵巢癌的多药耐药带来了新的希望。

摘要：目的　构建在哺乳动物细胞中表达mdr1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)的表达质粒 ,并初步探讨其对耐药肝癌细胞mdr1mRNA的抑制作用及抗肿瘤药物耐药性的影响。方法　根据Genbank中mdr1mRNA设计的两条多聚核苷酸序列 ,退火形成双链DNA ,再与经双酶切后的载体PGE 1连接 ,构建 pshRNA mdr1重组质粒 ,在脂质体的介导下转染肝癌细胞株BEL 74 0 2 /ADM ,RT PCR分析mdr1mRNA的表达 ,MTT法检测阿霉素对细胞的半数抑制浓度 (IC50 )。结果　PCR和DNA测序证实了表达质粒构建成功 ,并能明显地抑制BEL 74 0 2 /ADMmdr1mRNA的表达 ,对阿霉素的耐药指数降低了17.5倍 ( 2 99.2 / 17.1)。结论　构建的 pshRNA mdr1表达质粒能有效地抑制转染细胞mdr1mRNA ,从而提高肿瘤细胞的药物敏感性。

摘要：【目的】探讨mdr1 siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的影响。【方法】设计合成两种针对mdr1 mRNA的siRNA双链分子(#4123 mdr1 siRNA和#4029 mdr1 siRNA),并转染入COLO 320DM和HT-29结肠癌细胞,观察其对结肠癌细胞mdr1 mRNA和P-gp表达的影响。并分别与5-FU、阿霉素和长春新碱等抗肿瘤药联用,观察结肠癌细胞活力的变化。用阿霉素处理后,观察转染mdr1 siRNA结肠癌细胞的细胞内阿霉素累积浓度的变化。RT-PCR检测细胞mdr1 mRNA的表达,免疫印迹法检测细胞P-gp的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内阿霉素累积浓度。【结果】#4123 mdr1 siRNA和#4029 mdr1 siRNA均可抑制COLO 320DM结肠癌细胞mdr1 mRNA和P-gp的表达,其最低有效浓度分别为5nmol/L和25nmol/L。同时mdr1 mRNA和P-gp表达的抑制伴随着抗肿瘤药(5-FU、阿霉素和长春新碱)对COLO 320DM结肠癌细胞毒性的增强和细胞内阿霉素累积浓度的增加。而在对照HT-29结肠癌细胞却观察不到此效应。【结论】mdr1 siRNAs能特异逆转结肠癌细胞的多药耐药性,为mdr1/P-gp依赖的多药耐药性结肠癌的治疗提供了一条新的途径。

摘要：应用计算机对ｍｄｒ１ｍＲＮＡ二级结构进行模拟，设计针对ｍｄｒ１ｍＲＮＡ１９５９位ＧＵＣ的锤头状（ｈａｍｍｅｒｈｅａｄ）核酶（ＲＺ１）基因，定点克隆于质粒ｐＧＥＭＥＸ１的ＢａｍＨⅠ和ＥｃｏＲⅠ位点上；将ｍｄｒ１ｃＤＮＡ８６４ｂｐ的片段亚克隆于ｐＧＥＭＥＸ１的ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲⅠ位点上，在Ｔ３启动子作用下体外转录成ＲＺ１和８６４ｎｔ的ｍｄｒ１ｍＲＮＡ，ＲＺ１在体外将８６４ｎｔ的ｍｄｒ１ｍＲＮＡ切割成两个片段，说明所设计的核酶可用于肿瘤细胞多药耐药性的逆转，改善肿瘤的化疗疗效。

摘要：目的构建由人mdr1启动子调控CD∷upp融合基因表达的重组腺病毒,为对耐药肿瘤体内外靶向基因治疗奠定基础。方法自行设计一对含XhoⅠ和HindⅢ酶切位点的mdr1引物,从外周血中提取人类基因组DNA,通过PCR扩增mdr1启动子并插入PGL3-enhancer载体上,获得PGL3-mdr1质粒。从PORF-CD∷upp质粒中切下CD∷upp基因,插入PGL3-mdr1中mdr1启动子下游,并从中切下目的基因mdr1-CD∷upp,克隆到腺病毒穿梭质粒中,将带目的基因的穿梭质粒pAdTrack-mdr1-CD∷upp。与含有pAdeasy-1的BJ5183菌电转化,筛选提取>30 kb的阳性克隆,经线性化后转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增出重组腺病毒中的目的基因mdr1、CD∷upp等方法加以鉴定。结果成功构建了含mdr1-CD∷upp靶向自杀基因的重组腺病毒载体Ad-mdr1-CD∷upp,病毒滴度为3.015;1010pfu/ml。结论该重组腺病毒的构建为下一步研究其对mdr1耐药细胞系的特异性杀伤作用和对耐药肿瘤模型的靶向基因治疗提供基础。

摘要：多药耐药基因mdr1和 (或 )MRP1过度表达是引起肿瘤细胞对化疗药物产生多重耐药性的重要原因 .在以往研究抗mdr1基因的核酶 (196mdr1 Rz)的基础上 ,合成了针对MRP1基因 2 10和 730编码子的核酶 (2 10MRP1 Rz ,730MRP1 Rz) ,同时利用RNA二级结构分析程序mfold 3 0设计合成了一种双靶位自剪切核酶体系 (Coat) .将 196mdr1 Rz和 2 10MRP1 Rz基因同时载入到该体系中 ,建立了抗mdr1 MRP1双靶位核酶 .在无细胞体系中对上述核酶进行的生物活性实验表明 ,2 10MRP1 Rz与 730MRP1 Rz相比能够更有效地切割底物 ;载入Coat的抗mdr1和MRP1核酶均能得以有效释放 ,同时切割各自的靶RNA序列 ,切割效率与单靶位核酶一致 ;

摘要：本研究利用短发夹RNA(sh RNA)沉默SGC7901/ADM细胞mdr1基因表达,增强人胃癌SGC7901/ADM细胞对姜黄素的敏感性。根据mdr1基因序列设计3对编码sh RNA的DNA模板,克隆到p Silencer 3.1-H1 neo(p3.1)上构建3种sh RNA表达载体,转染SGC7901/ADM细胞,q RT-PCR和Western blotting检测mdr1基因沉默效果,用荧光显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活力。结果显示,3种sh RNA表达载体转染细胞后均能不同程度沉默mdr1基因的表达,增强了细胞对姜黄素的敏感性。