摘要：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是医院内感染的重要病原之一，除对甲氧西林耐药外，还对临床上广泛应用的多种抗生素耐药，其所致感染呈散发或爆发流行，治疗困难、死亡率高，已成为临床治疗上的一大难题。我们根据PBP2a编码基因设计了一对meca引物，用16SrRNA基因和为参照，采用PCR法可快速检测临床分离的金黄色葡萄球菌中的meca基因，用于MRSA的筛选和鉴定。

摘要：meca是耐甲氧西林葡萄球菌携带的耐药基因。本实验根据克隆的meca基因序列,在保守区设计了一套环介导等温扩增(LAMP)引物,通过条件优化,建立了耐甲氧青霉素meca基因LAMP检测方法,其最佳工作条件为:甜菜碱浓度为0.8 mol/L,Mg2+浓度为20 mmol/L,反应温度63℃,时间50 min。此方法可在60 min左右完成对meca基因的检测,特异性好,meca基因的LAMP检测灵敏度比PCR高100倍。对38株葡萄球菌分离株的meca基因的检测表明,阳性携带率为44.7%。

摘要：目的针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌meca基因扩增片段,设计一种茎环结构的DNA分子探针,运用荧光显微镜观测DNA分子探针与meca基因扩增产物杂交后的荧光信号。方法采用Beacon designer 7.0软件对meca基因的特异性扩增片段设计茎环结构的DNA分子探针,应用荧光显微镜检测meca基因扩增片段与探针杂交荧光信号。结果通过荧光显微镜观测出28株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和8株铜绿假单胞菌对照菌的特异性扩增片段,与DNA分子探针杂交后,荧光信号强度差异有统计学意义;该杂交条件优化:50℃为最佳杂交温度;10 h为最佳杂交时间。结论茎环结构DNA分子探针技术,结合荧光显微镜可高灵敏检测meca基因的扩增片段,meca基因是金黄色葡萄球菌耐甲氧西林的主要原因。

摘要：目的　应用聚合酶链反应技术 ( PCR)快速检测耐甲氧西林葡萄球菌 ( MRS)的 mec A基因 ,与相关抗生素药敏表型试验对照分析 ,为临床合理使用抗生素提供实验室依据。方法　根据文献我室自行设计的一对引物[1],建立了 MRS的 mec A基因的 PCR检验法 ,检测我院临床各科分离到的 52株葡萄球菌标本 ,同时进行药敏试验和 m ec A基因的 PCR法检测。结果　 PCR检测 52株葡萄球菌 mec A基因 38株阳性 ,耐苯唑西林 ( OX)的葡萄球菌 32株中 ,mec A基因阴性 1株。苯唑西林敏感而 m ec A阳性 7株。两种方法经 χ2检验结果差异无显著性 ( P>0 .50 )。结论　 mec

摘要：目的利用PCR技术扩增池州地区金黄色葡萄球菌(SA)meca基因,同时分析其耐药性并探讨两者的关联。方法临床各科室送检标本中分离出79株金黄色葡萄球菌,应用西门子Microscan-walkway 96plus鉴定及药敏分析仪进行常规药敏检测,计算耐药率;采用苯唑西林MIC法、头孢西丁MIC法筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA);同时设计特异性引物,采用聚合酶链式反应(PCR)检测Mec A基因,用凝胶成像仪观察结果。结果 79株金黄色葡萄球菌中苯唑西林MIC法阳性33株,头孢西丁MIC法36株,meca基因扩增阳性36株,MRSA检出率为45.57%(扩增法);发现3株苯唑西林敏感的MRSA。meca(+)与meca(–)均未发现万古霉素、利奈唑胺、达托霉素耐药菌株,但对青霉素都高度耐药,两者的差异无统计学意义(P>0.05);MSSA对庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、红霉素、四环素等耐药率均低于MRSA,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论池州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌已较为常见,其主要耐药机制为携带meca基因,PCR扩增阳性菌株耐药性明显高于阴性,两者差异有统计学意义。已出现苯唑西林敏感的MRSA(OS-MRSA)。

摘要：目的探讨斑点杂交技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因mec A的应用价值。方法设计mec A基因特异性引物,用地高辛标记;制备mec A基因探针,运用斑点杂交方法、聚合酶链反应(PCR)法检测mec A基因。结果 100例临床分离的金黄色葡萄球菌中共检出mec A基因阳性32例,阳性率为32%;PCR方法检出阳性36例,阳性率为36%。结论通过斑点杂交技术可以方便、特异地检测出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mec A基因。

摘要：目的　设计慢性上颌窦炎中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的快速检出方法。方法　利用多重聚合酶链反应 (MPCR)技术 ,同时检测同一DNA模板中的金黄色葡萄球菌耐药基因meca及金黄色葡萄球菌固有的femA基因。结果　femA基因为金黄色葡萄球菌的特有基因 ,meca基因在MRSA中检出率为 96 .2 %(5 1/ 5 3例 )。结论　MPCR方法能快速准确地鉴定MRSA。

摘要：目的建立检测引起血流感染中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)meca基因的实时荧光PCR法。方法设计meca引物,优化荧光实时PCR实验条件,并用该法检测临床分离的78株金黄色葡萄球菌引起血流感染标本,其结果与头孢西丁纸片扩散法的结果进行比较。结果 78株金黄色葡萄球菌中,荧光实时PCR法检测出meca基因阳性38株、阴性40株;头孢西丁纸片扩散法检测出MRSA 27株、MSSA 51株,经配对卡方检验,荧光实时PCR法检出率显著高于头孢西丁纸片扩散法(P<0.01)。结论荧光实时PCR法能敏感、特异检测MRSA引起的血流感染,比一般MRSA表型检测更加简便、快速。

摘要：目的建立q PCR法快速检测金黄色葡萄球菌及其mec A基因,以期快速精准诊断金黄色葡萄球菌感染及初步判断耐药情况。方法从NCBI数据库下载金黄色葡萄球菌nuc、atl、ica B、fnb A、hla、srap基因序列用于鉴定标志筛选,mec A基因序列用于MRSA标志筛选;经DNA MAN比对后,选择各基因保守区分别设计1~2套引物、探针,建立单重及双重q PCR,用临床分离株及标准菌株筛选出检测性能最好的基因片段作为检测标志物,建立金黄色葡萄球菌鉴定和耐药双重q PCR检测方法,并进行性能评价。结果经筛选,金黄色葡萄球菌atl基因(CP009361.1:1010217~1010341)、mec A基因(KF058908.1:1715~1843)两片段检测性能最优,将其作为标志物建立双重q PCR法。该方法的检测下限均低至4 copies/反应;扩增线性范围均达2.0×102~8copies/m L。335份金黄色葡萄球菌(含94份MRSA)培养阳性的患者样本中,q PCR法分别检出SA 335份,MRSA 94份;95份金黄色葡萄球菌培养阴性的患者样本中,q PCR法分别检出SA 17份,MRSA 4份,经PCR产物测序,与标准菌株同源性均≥90%。双重q PCR法从样品处理到报告结果≤2.0 h。结论 q PCR法方法简便、快速、灵敏度高、特异性好,可望提高金黄色葡萄球菌感染的诊断能力并实现快速检测,为尽早精准治疗赢得时间。

摘要：目的利用实时荧光定量PCR技术,建立快速敏感特异的检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法以MRSA meca基因为靶序列设计引物和探针,以自MRSA中提取的DNA为模板,优化引物、探针的浓度和退火温度,同时验证方法的特异性、敏感性、重复性、灵敏度和线性范围,并与K-B法和微量琼脂稀释法(MIC)相比较。结果建立的反应体系在上游引物、下游引物浓度为0.2 mmol/L、退火温度为55℃时,具有良好的特异性和敏感性,与大肠埃希菌等8种细菌均无交叉反应;对MRSA检测的灵敏度达到10 CFU/ml。结论建立的实时荧光PCR方法特异、灵敏、快速,能对MRSA做出快速准确的报告,实现准确、快速和定量检测。