摘要：目的:通过构建携带针对mir-194的慢病毒沉默及过表达载体,研究mir-194对骨肉瘤细胞转移的影响。方法:以mir-194前体及成熟体序列为模板,设计引物,进行PCR扩增,酶切后克隆于慢病毒载体plent-i GFP中,转染293T细胞,包装慢病毒颗粒,检测滴度,最终对人骨肉瘤细胞系U2-OS进行感染。获取稳定感染细胞后,进行Transwell、划痕等实验。结果:1)慢病毒表达质粒构建成功,沉默表达及过表达重组慢病毒的滴度分别为4×108TU/mL及1.5×108TU/mL;2)稳定过表达mir-194的人骨肉瘤细胞系U2-OS的转移能力较其他组有明显降低(P<0.01)。结论:成功构建了mir-194慢病毒表达载体,mir-194的表达水平对U2-OS细胞的转移能力具有显著影响,mir-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点。

摘要：目的明确microRNA-194(mir-194)对神经胶质瘤细胞增殖的抑制作用。方法设计合成mir-194 mimicis并转染U87细胞1~6d后用噻唑蓝实验检测其对细胞存活率的影响,并通过蛋白免疫印迹实验检测mir-194 mimicis转染U87细胞36h后对靶基因CDH2蛋白表达水平的下调作用。结果 100ng的mir-194 mimicis可显著抑制CDH2基因的蛋白表达水平并抑制神经胶质瘤细胞的增殖。结论 mir-194具有抑制神经胶质瘤细胞增殖的作用;下调CDH2基因的蛋白表达水平是mir-194抗肿瘤作用的重要分子机制。