摘要：目的构建micoRNA-205(mir-205)慢病毒表达载体,感染乳腺癌细胞MB231,建立稳定表达mir-205的MB231细胞株,观察其增殖能力的变化。方法酶切慢病毒载体GV369,设计并合成mir-205引物,通过PCR扩增目的基因连接到慢病毒载体上。对重组质粒双酶切鉴定,进行慢病毒hsa-mir-205的包装和滴度测定。用构建好的慢病毒感染MB231细胞,定量PCR检测细胞中mir-205表达水平的变化,MTT和划痕实验观察过表达mir-205后MB231细胞增殖和迁移能力的变化。结果测序显示,目的基因连接慢病毒载体成功。慢病毒稳定感染了MB231,定量PCR结果显示,感染hsa-mir-205的MB231中mir-205表达明显提高,MTT和划痕实验结果显示感染后MB231的细胞增殖和迁移能力受到抑制。结论成功构建了mir-205慢病毒表达载体,并建立了稳定表达mir-205的细胞株MB231,显示其可能负调控乳腺癌细胞的恶性生物学行为,为后期进一步研究mir-205的功能和机制奠定了基础。

摘要：目的构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-mir-205,并使其在肾上腺皮质癌细胞SW-13中稳定表达。方法依据mirbase数据库中pre-mir-205序列设计引物,PCR扩增pre-mir-205基因并将其克隆至线性化的pcD-NA3.1(+)质粒中,获得重组表达载体pcDNA3.1(+)-mir-205,经双酶切及测序分析后,将其及对照空载体转染肾上腺皮质癌SW-13细胞,采用实时定量RCR法鉴定mir-205在SW-13细胞中表达。结果酶切和测序结果均证实pcDNA3.1(+)-205重组质粒构建成功,经实时定量RCR检测表明转染pcDNA3.1(+)-205的SW-13细胞中mir-205阳性高表达。结论真核表达载体pcDNA3.1(+)-205在SW-13中稳定转染,为进一步研究mir-205在肾上腺皮质癌细胞SW-13中的功能及基因调控机制奠定了实验基础。

摘要：目的建立检测子宫内膜癌患者血清中mir-205表达水平的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法。方法设计mir-205逆转录引物和PCR扩增引物进行RT-PCR,以U6为内参,检测试验组和健康对照组患者血清中mir-205的表达水平;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测患者血清中C反应蛋白和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的含量。结果试验组患者血清中mir-205的表达水平显著高于健康对照组(P0.05)。结论所建立RT-PCR法检测mir-205表达水平快速简便、灵敏度高、特异性好,在子宫内膜癌的辅助诊断中有较好的应用前景。