摘要：目的构建pcDNA6.2-GW/EmGFP-mir-29c真核表达载体,为进一步研究mir-29c的功能和靶基因鉴定奠定基础。方法根据mir-29c成熟体序列设计合成1对mirNA寡聚单链DNA,经退火后克隆到真核表达载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-mir中,瞬时转染肺腺癌A549细胞后,经实时荧光定量PcR检测pcDNA6.2-GW/EmGFP-mir-29c在肺癌细胞中表达mir-29c。结果 A549转染pcDNA6.2-GW/EmGFP-mir-29c 24 h后,mir-29c表达量上升,明显高于阴性对照,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建真核表达载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-mir-29c,并能有效表达mir-29c。

摘要：目的筛选影响乳腺癌组织中异常表达的DNA甲基转移酶DNMT3A的mirNA,并考察其对乳腺癌细胞生长的影响,以探讨mirNA对DNA甲基化甲基转移酶的调控在乳腺癌发生发展中的作用,从而为乳腺癌的早期诊断、早期预防提供新的分子标志及治疗靶点.方法采用荧光定量PcR检测乳腺癌患者癌组织中DNA甲基转移酶的表达,通过Targetscan分析设计并合成3种mirNA模拟体,转染HER基因阳性乳腺癌细胞Sk-Br-3,应用实时荧光定量PcR检测转染后mirNA的相对表达量;应用免疫印迹分析及双荧光素酶报告基因实验筛选影响DNMT3A的mirNA;应用细胞生长曲线考察mirNA模拟体对Sk-Br-3细胞生长的影响.结果实时荧光定量PcR结果显示:乳腺恶性导管癌患者癌组织中DNMT3A及DNMT3B的表达均显著增高(P<0.01);免疫印迹分析与双荧光素酶报告基因结果均可见,与对照组比较,mir-29c可以显著抑制DNMT3A的表达,并抑制乳腺癌细胞Sk-Br-3的生长.结论mir-29c可与DNMT3A3′端非编码区结合并抑制DNMT3A的表达,从而影响HER基因阳性的乳腺癌的发生发展.