摘要：目的 利用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术建立可同时检测mir-888和mir-891a的体系,并评估其在精液鉴定中的应用价值。方法 通过设计不同荧光修饰的报告基团的水解探针实现对mir-888和mir-891a的双重ddPCR检测,对5种体液(外周血、月经血、精液、唾液、阴道分泌液)共75份样本进行检测,采用Mann-Whitney U检验进行差异性分析,通过ROC曲线分析评估mir-888和mir-891a区分精液的能力并获得鉴别的最佳截断值。结果 该体系双重检测与单独检测结果差异无统计学意义,检测灵敏度可达到0.1 ng总RNA,批内与批间变异系数均小于15%。经双重ddPCR检测,精液中mir-888和mir-891a的表达量均高于其他体液。经ROC曲线分析,mir-888的AUC为0.976,最佳截断值为2.250 copies/μL,判别正确率为97.33%;mir-891a的AUC为1.000,最佳截断值为1.100copies/μL,判别正确率为100%。结论 本研究成功建立了双重ddPCR检测mir-888和mir-891a的方法,体系的稳定性和重复性良好,可用于精液鉴定,mir-888和mir-891a均具有较高的精液鉴别能力,且mir-891a的判别正确率更高。