摘要：目的利用PCR方法建立一种基于momp基因的衣原体分子甄别方法。方法根据衣原体momp基因的恒定区和可变区分别设计衣原体科特异性引物和种特异性引物,利用PCR方法对本实验室保存的衣原体进行扩增,以达到甄别的目的。利用限制性片段长度多态性(RFLP)分析科特异性PCR扩增产物,研究momp基因的多态性。结果利用建立的PCR方法对本实验室保存的九株衣原体进行了研究,结果表明八株衣原体都是鹦鹉热嗜衣原体,一株为沙眼衣原体。利用限制性片段长度多态性(RFLP)分析科特异性PCR扩增产物,分析了D34、B11001、CW2和CP12四株衣原体,结果可以产生两种不同的带型。结论利用建立的PCR方法可以达到检测甄别衣原体的目的,并可以通过RFLP分析衣原体的侵袭性。

摘要：克隆了肺炎嗜衣原体外膜主蛋白(major out membrane protein,momp)基因,并进行了原核表达。根据GenBank公布的肺炎嗜衣原体momp基因序列,设计克隆引物后用普通PCR方法扩增出肺炎嗜衣原体momp基因的完整片段,将其克隆到pMD-19T后进行测序,经序列比对正确后将此片段亚克隆到表达载体pET-32a(+)中,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达,再采用SDS-PAGE和Western-Blot检测重组蛋白的表达情况。结果表明:本研究克隆了肺炎嗜衣原体momp基因并在原核系统中成功表达了momp重组蛋白,且WesternBlot显示该重组蛋白具有免疫学活性。

摘要：为探讨羊流产嗜性衣原体momp蛋白的生物学功能、揭示其在流产衣原体病诊断和防治中的作用。本试验根据Gen Bank公布的流产嗜性衣原体主要外膜蛋白(momp)基因序列,设计并合成4条特异性引物,以羊流产嗜性衣原体青海分离株感染的鸡胚卵黄囊中提取的衣原体基因组为模板,应用套式PCR扩增到momp全基因序列。通过生物信息学软件对该基因的结构及其推导的氨基酸序列进行了预测分析,同时分析了与其他流产嗜性衣原体的同源性。结果显示,该基因全长1 170 bp,可编码389个氨基酸,蛋白分子量理论值为41.8 ku,理论等电点7.54,编码蛋白理化性质较稳定。其第1位到第19位氨基酸残基为信号肽序列,具有3处N-糖基化位点。含有多个能被其他酶修饰的位点,以无规则卷曲为主,含5个跨膜区,3个亲水性较强的抗原表位。同源性分析表明与其他流产嗜性衣原体分离株的一致性高在93%以上,系统进化分析表明与OCLH196株(序列号为AJ440239)位于同一进化分支。

摘要：试验旨在设计和构建基于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白和鹦鹉热衣原体(Cps)主要外膜蛋白(momp)的抗原多表位DNA疫苗,并分析其免疫原性。研究利用免疫信息学方法筛选出IBV S1蛋白和Cps momp蛋白的优势抗原表位,设计多表位基因M,并利用多种生物信息学软件对其进行预测分析;将M基因、S1和momp串联基因分别连接至真核表达载体pEGFP-N1并转染至DF-1细胞,利用Western blot检测目标蛋白的表达情况。将上述重组质粒肌内注射7日龄雏鸡,四免后检测免疫鸡血清中特异性抗体IgG、细胞因子及T淋巴细胞含量。结果显示:构建的表位蛋白结构稳定、免疫原性较好且无副作用;重组质粒pEGFP-M和pEGFP-S1-momp与预期大小相符;与pEGFP-N1组和PBS组相比,四免后,pEGFP-M免疫组鸡血清中抗IBV IgG和抗Cps IgG抗体水平极显著升高(P<0.01),与pEGFP-S1-momp组相当;pEGFP-M组鸡血清中细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平,T淋巴细胞抗原CD3+、CD4+和CD8+含量均极显著高于pEGFP-N1组和PBS组(P<0.01)。结果表明,构建的多表位DNA疫苗pEGFP-M能够激发鸡的体液免疫和细胞免疫反应,为研制同时预防鸡传染性支气管炎和禽衣原体病的多表位疫苗奠定基础。

摘要：目的建立一种特异、灵敏、重复性好的鹦鹉热嗜性衣原体的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。方法利用鹦鹉热嗜性衣原体momp基因的特异保守序列设计引物和MGB探针,通过优化,获得最佳反应体系与反应条件,同时进行特异性、重复性、灵敏性评价与Spike-test实验进行临床应用性评价,利用该检测方法对禽鸟类粪便样品进行检测,并与常规PCR检测方法进行比较。结果该方法在0.01pg^100pg范围内线性相关系数为0.999,扩增效率为97.7%;对鹦鹉热嗜性衣原体菌株检测结果均呈现阳性,而非鹦鹉热嗜性衣原体菌株及其它衣原体菌株为阴性;重复性试验中,变异系数为0.317%~0.563%;检测灵敏性为0.01pg;Spike-test试验中最低检出量为25个EB;该方法对禽鸟类粪便样品的检出率为14.3%(40/282),高于常规PCR检测法的7.4%(21/282)。结论本文所建立的Taqman-MGB荧光定量PCR检测法是一种灵敏、高效、稳定,可在嗜性衣原体属中准确检测鹦鹉热嗜性衣原体的方法,该方法的建立更有意于今后对禽鸟类实施鹦鹉热的临床诊断与分子流行病学研究。

摘要：目的建立一种简便、快速、特异的荧光定量PCR检测方法,用于鹦鹉热嗜衣原体的快速检测。方法以主要外膜蛋白(momp)基因为靶序列设计特异性引物,采用SYBR GreenⅠ随机渗入法建立实时定量PCR检测方法。结果循环阈值(Ct)与标准DNA模板在1.0×102-1.0×107拷贝/μl浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.989。该方法用于鹦鹉热嗜衣原体的检测具有很高的特异性,其敏感性与常规PCR相比可以提高100倍。结论本研究建立的检测鹦鹉热嗜衣原体的实时定量PCR检测方法具有很高的特异性和敏感性,可以用于鹦鹉热嗜衣原体的检测。

摘要：为建立一种快速、准确检测猪流产衣原体(Chlamydophila abortus,***)实时荧光定量PCR检测方法,根据***主要外膜蛋白(momp)的基因序列设计1对引物和1条分子探针(FAM和Dabycl标记),以构建的重组质粒作为标准阳性质粒,通过筛选和条件优化,建立了猪流产衣原体实时荧光定量PCR诊断方法。重复性、特异性及敏感性试验结果显示,重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.0×10~2拷贝/μL^1.0×10~7拷贝/μL内具有良好的线性关系,其相关系数为0.993 2,扩增效率为94.7%,灵敏度达到1.0拷贝/μL,批间批内变异系数(CV)为0.022%~0.051%,建立的方法可有效区分流产衣原体、猪支原体、猪衣原体、肺炎衣原体及猪蓝耳病毒等病原,具有良好的临床应用前景。

摘要：根据GenBank中收录的鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白(momp)基因序列设计合成1对引物,以禽源鹦鹉热衣原体基因组为模板,应用PCR扩增momp基因,将其克隆到pUCm-T载体上,并进行序列分析。结果显示,本株禽源鹦鹉热衣原体momp编码基因全长为1176 bp,与国外报道的火鸡鹦鹉热衣原体TT3株的momp基因同源性为91.9%,与鹦鹉鹦鹉热衣原体6BC株momp基因的同源性为83.1%。