摘要：江苏省某种鹅场15日龄雏鹅疑似感染鸭疫里氏杆菌,无菌采取脑、心脏、肝和脾等病料,进行病原分离纯化,通过细菌生化试验、血清型鉴定及设计特异性扩增鸭疫里氏杆菌外膜蛋白A(ompa)基因的引物,进行PCR扩增,从8份病料中分离到2株血清2型鸭疫里氏杆菌。药物敏感性试验表明,2个分离株对红霉素和阿奇霉素的敏感性高于其他药物。对ompa基因PCR产物进行基因序列测定,在NCBI上进行基因序列同源性比对,其基因序列与多株已发表的序列的同源性达到99%。进化分析表明,分离株均与D2、G2株具有很近的亲缘关系。

摘要：利用本实验室分离、鉴定并保存的鸭疫里默氏杆菌血清1型湖北云梦分离株(RA-YM),根据GenBank上的序列设计了1对引物,用PCR方法扩增了RA-YM株的主要外膜蛋白ompa基因,并克隆到pMD18-T载体,序列测定结果表明ompa基因全长1152bp,序列同源性分析表明该基因相当保守,与其他不同RA菌株ompa基因之间的核苷酸序列同源性为93%～97%。用pGEX-KG构建了原核表达载体pKG-ompa,在大肠杆菌中进行了高效表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的30%,主要为包涵体形式。SDS-PAGE电泳结果显示表达的融合蛋白大小约为68000,Western-blot结果表明该表达蛋白具有抗原性。

摘要：为快速检测家畜衣原体,选取家畜衣原体ompa基因的高度保守区域,设计了针对家畜衣原体的引物和探针,优化反应条件,建立家畜衣原体荧光定量PCR检测方法。结果显示:该方法的最低检测限为1.68×10^(1)copies/μL,在1.68×10^(2)~1.68×10^(6)copies/μL范围内具有良好的线性关系;该方法可特异性检测家畜衣原体,与肺炎衣原体、沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体、流产衣原体4种4个菌株无交叉反应,表明特异性好;其批间重复试验和批内重复试验的变异系数分别为0.14%~0.51%、1.09%~1.49%,表明重复性良好。本方法可用于家畜衣原体的早期检测和流行病学调查。

摘要：为了解国内禽多杀性巴氏杆菌流行株（Pasteurellamultocida，Pm）ompa基因的变异情况，参考Gen-Bank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计一对特异性引物，采用PCR方法对11个禽Pm菌株和3个荚膜型参考株（A，B，D）的ompa基因进行扩增，将各菌株纯化回收的扩增产物与pMDl8-T载体连接，筛选阳性克隆进行测序。结果表明：14个菌株的ompa基因开放阅读框在1047～1077bp之间，其中长度为1062bp的有9个菌株；SignalIP4．0预测表明，信号肽均为N端21个氨基酸残基，成熟蛋白氨基酸残基数量在327～332之间，推测的分子量为35．19～36．35kD。与GenBank中12个菌株ompa基因核苷酸序列比对及遗传进化分析发现，核苷酸同源性为85．3％～100％；氨基酸同源性为83．1％～100％；其中C48—1，1010，9003，890920，921012，xj等6个国内禽Pm分离株ompa序列同源性为100％。由此可见国内禽Pm菌株ompa基因非常保守。

摘要：根据GenBank中鸡肠炎沙门氏菌ompa基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌贵州分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌ompa基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-ompa,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,实现了鸡肠炎沙门氏菌ompa蛋白在大肠杆菌中的表达。SDS-PAGE分析结果表明,该重组蛋白的分子质量约为55 ku,可溶性分析结果表明表达蛋白大部分以包涵体形式存在。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白具备免疫原性。

摘要：本研究从贵州发病鸭中分离到1株致病菌,经生化试验、16S rRNA序列分析、血清学试验和动物回归试验,鉴定为1型鸭疫里氏杆菌(RA),药敏试验结果表明,其对头孢拉定、头孢曲松钠、头孢噻肟和氟苯尼考高度敏感;同时根据GenBank中鸭疫里氏杆菌ompa基因序列,设计1对引物,成功克隆出鸭疫里氏杆菌ompa基因,扩增产物大小为1149 bp。采用DNAStar Protean程序,综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数,对鸭疫里氏杆菌ompa基因的氨基酸序列进行了B细胞表位预测,为进一步研究鸭疫里氏杆菌表位疫苗和分子诊断技术的建立奠定基础。

摘要：根据Gen Bank中的鸡肠炎沙门氏菌ompa基因序列,设计了1对引物,成功克隆出鸡肠炎沙门氏菌ompa基因,扩增产物大小为1053bp。采用DNA Star Protean程序,综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数,对鸡肠炎沙门氏菌ompa基因的氨基酸序列进行了B细胞表位预测,为进一步研究鸡肠炎沙门氏菌表位疫苗和分子诊断技术的建立奠定基础。

摘要：为研究鸭疫里氏杆菌(RA)16S rRNA变异与ompa基因之间的关系,提取了RA吉林分离株JL-RA1和JL-RA3总DNA,并设计特异性引物扩增两株RA保护性抗原ompa全基因序列。结果显示,扩增出的16S rRNA序列大小均为1478 bp,ompa片段序列大小均为1164 bp,与预期结果一致。扩增的16S rRNA与GenBank中已知的RA 16S rRNA序列同源性高达99.0%～99.9%,扩增的ompa序列与GenBank中已知的RA ompa序列同源性达93.3%～100%,编码蛋白质的氨基酸序列同源性为96%～100%。

摘要：本试验旨在探究羊源多杀性巴氏杆菌ompa基因的原核表达及其生物信息学特征。以羊源多杀性巴氏杆菌HN-01株基因组为模板,设计特异性引物扩增ompa基因;构建pET-28a(+)-ompa重组质粒后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,将鉴定正确的重组菌经IPTG诱导表达;通过SDS-PAGE及Western blotting分析表达蛋白的特征,并运用生物信息学工具对ompa基因序列进行分析。结果显示,羊源多杀性巴氏杆菌ompa基因大小约为1044bp,该基因序列与HN-06株的同源性达89.72%。通过诱导后发现,pET-28a(+)-ompa重组菌最佳诱导条件为1mmol/LIPTG37℃诱导6h,表达的重组蛋白大小约为40ku,以包涵体的形式存在。Western blotting结果显示,约40ku的重组蛋白携带His标签。经生物信息学分析,ompa分子式为C1684H2619N457O505S3,属碱性疏水蛋白,其多肽链的1-21位氨基酸为信号肽区域,并具有多种结构。综上所述,ompa可能具有特殊结构,与众多外膜蛋白结构特点相似。本研究构建了多杀性巴氏杆菌ompa基因原核表达系统,优化诱导条件后能稳定获得ompa重组蛋白,为进一步探究巴氏杆菌的致病机理提供理论依据。

摘要：为了解山羊流产衣原体陕西分离株ompa和CPAF基因的遗传变异情况及制备检测抗原,根据GenBank收录的ompa和CPAF基因序列设计合成特异性引物,分别进行ompa基因和CPAF基因的基因克隆、序列分析及原核表达。结果表明,成功克隆出大小为1053 bp的ompa基因和大小为1056 bp的CPAF基因;核酸序列分析显示ompa和CPAF基因与已报道的山羊流产衣原体ompa和CPAF基因同源性分别为99.54%~99.91%和91%~100%;成功构建了表达ompa和CPAF基因的原核表达菌株,经IPTG诱导后分别表达38.6 ku和38.7 ku的ompa和CPAF重组蛋白,Western blot显示纯化复性的两种重组蛋白均能与山羊流产衣原体阳性血清相结合。试验结果为进一步建立山羊流产衣原体抗体ELISA检测方法奠定了基础。