摘要：目的建立一种早期快速检测铜绿假单胞菌的方法。方法根据铜绿假单胞菌特异的opri基因设计引物,聚合酶链反应合成特异探针,光敏生物素标记细菌DNA,应用反向斑点杂交法检测铜绿假单胞菌。结果所合成的探针具有高度特异性,能鉴别铜绿假单胞菌,与其他细菌、病毒、真菌间无交叉反应。该方法能检测出100 ng细菌DNA。结论反向斑点杂交法具有快速、特异的优点,对铜绿假单胞菌的早期检测具有重要意义。

摘要：目的构建荧光实时定量PCR(FQ-PCR)标准品测定铜绿假单胞菌opri基因,以此测定铜绿假单胞菌菌量。方法以铜绿假单胞菌的opri基因为目的基因设计探针引物,提取细菌基因组DNA,与pMD 18-T Vector连接并转化到大肠杆菌中。用氨卞青霉素筛选出白色菌落,提取含目的基因质粒,并用HindⅢ限制酶进行线性化处理,通过直接PCR、OD值测定及DNA片段测序鉴定其特异性。根据OD值确定浓度,制备FQ-PCR梯度浓度参考标准品,做出标准曲线,检测各样品菌菌量。结果铜绿假单胞菌opri基因的目的片段成功制备,获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性,并获得很好的标准曲线(相关系数0.994),成功检测了铜绿假单胞菌标准菌株、培养株的菌量,而大肠杆菌及阴性对照无扩增。结论成功构建FQ-PCR检测铜绿假单胞菌opri基因的定量参考标准,荧光实时定量法可以快速检测铜绿假单胞菌。