摘要：对32例舌鳞癌的原发灶及其颈部淋巴转移灶标本的DNA分别进行亚硫酸氢钠处理,并设计相应引物(p16-M、p16-U)进行Q-MSp扩增,检测样本中的甲基化比例,比较2组甲基化一致性。发现原发灶与其颈部淋巴转移灶p16甲基化状态的一致率为90.62%,一致率有统计学意义(p<0.05)。由此推测舌癌原发灶及其颈部转移淋巴结中p16基因启动子CpG岛甲基化现象具有一致性,两者可作为互相预测p16甲基化状态的参考。

摘要：目的研究舌癌与p16基因启动子区域的Cp G岛甲基化的潜在关系,并了解p16基因甲基化与临床病理的关系。方法观察组舌癌标本及对照组正常舌组织标本所提取的DNA,经亚硫酸氢钠处理改变甲基化碱基,设计相应引物(p16-M、p16-U)Q-MSp扩增,检测样本中的甲基化比例。结果观察组甲基化阳性率为64.58%(31/48),对照组阳性率仅2.08%(1/48),差异有统计学意义(p<0.05);舌癌个体中pl6基因甲基化比例与病理分期、发生淋巴转移、组织学分化程度相关,与年龄、性别无关。结论 p16基因启动子Cp G岛甲基化现象与舌鳞癌的发生发展关系密切;癌症发展越晚期、肿瘤浸润更深、发生转移、更低分化者p16基因启动子Cp G岛甲基化的频率更高,但与患者年龄、性别等因素无关。

摘要：目的建立一种基于错配杂交化学发光检测p16基因启动子区过甲基化的定量分析方法.方法用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化.设计合成1对不含CpG位点的引物,同时扩增甲基化或非甲基化目的DNA片段,用2条分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物进行杂交及化学发光检测,通过探针杂交信号强度比确定样品DNA中甲基化的p16基因的比例.结果错配杂交化学发光法具有较好的精密度(CV=5.2%～6.4%)和灵敏度(2.5×10-4pmol),检测已知混合样品的p16基因甲基化率分别为0%、23%、52 %、70% 及93%,与实际结果一致.结论本研究建立的错配杂交化学发光法是一种检测快速、操作简便的p16基因甲基化的定量检测方法.

摘要：目的探讨利用肺癌组织、癌旁组织p16基因甲基化的差异来指导精确放疗的临床价值。方法选取33例肺部疾病住院病人手术切除的肺组织标本,其中29例为肺癌,4例为良性肺部疾病。采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSpCR)法检测其p16基因甲基化状态。结果29例肺癌组织标本中12例(41.4%)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化,近癌旁组织、远癌旁组织标本中均未检测出甲基化存在。4例良性肺部疾病中肺脓肿1例,肺炎性假瘤3例,手术切除标本中均未检测出甲基化存在。结论MSpCR技术对肺癌病人标本中的异常甲基化检测具有特异性,可进一步应用于肺癌生物靶区设计的探讨。

摘要：1 材料和方法1.1 材料收集我院胸外科手术切除并经病理检查诊断为食管鳞癌的新鲜癌组织标本及远离肿瘤的正常食管组织作为对照各40例(未经放化疗及电化学治疗).其中男32例,女8例;年龄43岁～75岁(平均55.3岁).pTNM 分期参照1987年UICC 标准.其中,Ⅰ期0例;Ⅱ_A期10例;Ⅱ_B期9例;Ⅲ期19例,Ⅳ期2例.根据 p16基因组序列,在第2外显子两侧设计一对扩增引物;p1:5′-TGTTCYCTCTGGCAGGTCAT-3′;p2:5-CTCAGATCATCAGTCCTCAC-3′;pCR 产物长度342 bp.选用β-actin 做内对照,引物序列如下:p1:5′-GGCGGCACCACCAT-GTACCCT-3′;p2:5′-AGGGGCCGGACTCGTCATACT-3′,pCR 产物为312 bp.引物和4种10 mmol/L dNTp

摘要：目的建立一种基于错配杂交-化学发光检测的p16基因启动子区过甲基化的定量分析方法。方法用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化。设计合成一对不含CpG位点的引物同时扩增甲基化或非甲基化目的DNA片段,用两根分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物进行杂交,化学发光检测,通过两根探针的杂交信号强度之比确定样品DNA中甲基化的p16基因的比例。结果检测结果与肿瘤细胞DNA样品中甲基化的p16基因的量成正比,而且与其表达水平呈逆相关。结论与现有方法相比,本法是一种检测快速、操作简便的p16基因甲基化的定量检测方法。

摘要：研究对象为我院神经外科手术治疗的星形细胞瘤患者。首次手术肉眼全切除肿瘤，二次手术前未行放疗，共得到符合条件患者22例，对照组为外伤内减压脑组织标本8例。采用改良法提取石蜡切片DNA。p16基因参考赵坡等（中华病理学杂志，1997，26：310）设计的p16 exon2引物。内对照引物采用Izomoto（Cancer lett，1995，97：241-247）等设计的GApDH基因引物。pCR产物行凝胶电泳，采用图像分析软件计算两条扩增带的光密度比值。

摘要：为了解胶质瘤p16基因突变和蛋白丢失与其恶性程度的关系,我们用两种方法分别检测45例脑胶质瘤p16基因第2外显子的突变和蛋白丢失情况,结果报道如下对象和方法1.标本来源和DNA制备 45例脑胶质瘤标本取自我科手术标本。经病理学检查按WHO肿瘤分类标准:12例星形细胞瘤(WHO Ⅱ),18例间变性星形细胞瘤(WHO Ⅲ),15例胶质母细胞瘤(WHO Ⅳ)。每1标本分两份,一份置-70℃冰箱用于p16基因突变检测,一份石腊包埋用于p16蛋白丢失检测。每例取癌旁组织作为对照。DNA提取按常规方法进行。***引物及反应条件引物由北京医科大学设计合成。反应条件:94℃1分钟;用上。

摘要：在人类多种类型的肿瘤中频繁出现染色体9p21-22区域改变[1],这提示该区的改变可能与肿瘤的发生、发展有关.p15、p16基因位于该区,为阐明其在原发性膀胱移行细胞癌(TCC)中的作用,作者对其在膀胱TCC中的缺失改变进行了研究.一、材料与方法1. 标本来源:38例病理检查证实的原发性膀胱TCC和9例正常膀胱粘膜标本由近两年武汉大学中南医院泌尿外科手术获取. -70℃冰箱速冻保存, 以供提取DNA.2. DNA提取及聚合酶链反应(pCR)方法建立:组织DNA提取依常规方法进行.正常膀胱粘膜DNA作对照,3磷酸甘油醛脱氢酶(GApDH)基因作内对照,扩增p15、p16基因2个外元,即外元1和外元2.引物设计: p15E1: 5′ CGGAGCA-GCGTGGGAAAG3′, 5′CTGGATCGCGCGCCTCCC3′; p15E2: 5′GCTCCACCTGCCTTGCCCCG3′, 5′ATTAGGTGGGTGGGGGT-GGG3′; p16E1: 5′GAAGAAAGAGGAGGGGCTG3′, 5′GCGCTA-CCTGATTCCAATTC3′; p16E2: 5′CATTCTGTTCTCTCTGGCAG-3′, 5′CTCAGATCATCAGTCCTCAC3′.反应体系50 μl,模板DNA0.2 μg,MgCl2 1.5 mmol/L,KCl 50 mmol/L,Tris·Cl 10 mmol/L,dNTp0.2 mmol/L,每对引物各20 pmol/L,混匀后液体石蜡覆盖在pCR 扩增仪(GeneAmp pCR system 2400,美国perkin-Elmer公司)上扩增.扩增条件:95℃预变性5 min,55℃加 Taq DNA多聚酶1.25U,接着94℃,60 s;48℃～55℃,60 s;72℃,60 s;35个循环,最后72℃延伸5 min.扩增产物在2.0%醇脂糖凝胶电泳紫外灯下观察,分析缺失结果.

摘要：目的　对 2 5例膀胱移性细胞癌 (bladdertransitionalcellcarcinoma ,简称膀胱癌 )患者的p16基因第一、第二外显子纯合性缺失 ,第二外显子的点突变 ,第一外显子区 5 'CpG岛的甲基化情况及 p16蛋白表达进行检测 ,探讨 p16基因在膀胱癌中失活的方式及 p16蛋白表达与膀胱癌之间的关系。方法　取患者膀胱癌组织 ,用酚 /氯仿法提取癌组织基因组DNA ,设计p16基因第一、二外显子引物 ,采用聚合酶链反应(polymerasechainreaction ,pCR )、pCR 单链构象多态性(pCR singlestrandconformational polymorphism ,pCR SS Cp)、甲基化敏感限制性内切酶 pCR分析方法 ,对 2 5例膀胱癌患者的癌组织基因组DNA的 p16基因第一、二外显子的纯合性缺失、第二外显子点突变及第一外显子区 5 'CpG岛的甲基化情况进行分析。应用S p免疫组织化学方法检测 2 5例膀胱癌和 6例正常膀胱黏膜组织中 p16基因的表达情况 ,并分析其意义。结果　在这 2 5例膀胱癌患者中 ,发现 p16基因第二外显子缺失者有 4例 ,第一外显子和第二外显子共同缺失者有 1例 ,第一外显子缺失者 1例 ,p16基因的缺失率为 2 4 % (6 / 2 5 ) ;未发现 p16基因第二外显子的点突变 ;p16基因第一外显子区 5 'CpG岛的甲基化率为 6 9 6 % (16 /2 3)。