摘要：目的研究急性单核细胞白血病细胞系THp-1细胞MLL-AF9融合基因沉默对p27表达及转录调控的影响。方法选择THp-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因，设计并合成MLL-AF9小干扰RNA（siRNA）片段。应用脂质体转染方法，将MLL-AF9 siRNA导入细胞，通过流式细胞术检测siRNA转染效率，用RT-pCR法比较转染前后MLL-AF9 mRNA表达水平的变化，Western blot检测MLL-AF9蛋白水平沉默效果，比较细胞周期抑制蛋白p27表达变化，利用染色质免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，CHIp）技术研究MLL-AF9融合蛋白是否与p27启动子结合。结果转染MLL-AF9 siRNA后THp-1细胞MLL-AF9 mRNA相对表达水平（0．31±0．07）较对照组（1．25±0．13）明显受抑（p〈0．叭），p27mRNA表达水平（0．84±0．12）较对照组（0．35±0．03）明显上调（p〈0．01），应用ChIp结合pCR扩增的方法分析发现MLL-AF9融合蛋白可与THp-1细胞p27基因启动子区域的DNA片段结合。结论MLL-AF9融合基因沉默后可使p27表达上调，其机制可能为MLL-AF9基因沉默解除了MLL-AF9融合蛋白与p27启动子的结合，从而恢复p27基因的表达。

摘要：为了进一步研究蜱吸血时唾液腺的基因表达调控机制,并为蜱疫苗的制备筛选功能性抗原,本试验对从亚洲璃眼蜱雌蜱吸血前后唾液腺消减文库中筛选出的一个具有poly(A)尾的EST序列p27进行了研究。首先运用RACE技术扩增出该基因的5′端,在此基础上设计引物,扩增出该基因全长,此基因全长827 bp,其开放阅读框从第35个碱基始至第706个碱基止,预测分子量为27.28 ku,等电点4.22。生物信息学结构分析表明该基因含有跨膜区及多个活性位点,可能与细胞内DNA的转录相关;该基因与现有其他基因同源性很小,为一新基因;RT-pCR结果显示该基因在半饱血雌蜱的唾液腺、蜱壳、中肠均有表达,但在壳中表达丰度稍低。本研究克隆的p27基因序列已登录GenBank,序列号为EU180067。

摘要：地籍管理数据库特色研究;高层建筑房产面积测量的改进方法;GIS和DEM技术在贵州省县级农用地分等定级数据库中的应用探讨;集成的一体化城镇地籍管理信息系统设计;

摘要：目的:探讨沉默HeLa细胞的ClC-3氯通道基因后细胞周期分布的变化及其作用机制。方法:依照siRNA设计原则构建沉默ClC-3基因的ClC-3 siRNA并转染HeLa细胞;实验分为空白对照组(control组)、转染试剂对照组(Lipo组)、阴性对照组(negative siRNA组)和ClC-3 siRNA组。采用real-time pCR检测ClC-3 siRNA的沉默效率;流式细胞术检测细胞周期分布情况;Western blot检测ClC-3蛋白及相关细胞周期蛋白(cyclin)D1、细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)4、CDK6、p21和p27等表达。结果:CIC-3 siRNA成功沉默HeLa细胞的ClC-3基因。和其它组相比,ClC-3 siRNA组的细胞周期被阻抑在G_0/G_1期。CIC-3 siRNA组的cyclin D1、CDK4和CDK6蛋白表达水平明显下降,p21和p27蛋白表达水平明显上升。结论:沉默HeLa细胞ClC-3氯通道基因可影响cyclin D1、CDK4、CDK6、p21和27蛋白的表达水平胆抑HeLa细胞周期停滞在G_0/G_1期。

摘要：目的:构建携带人GFAp启动子和p27基因的重组腺病毒载体并进行鉴定,研究其转染星形胶质细胞后对细胞生长增殖的影响。方法:对实验室原有的pGFAp-IRES2-EGFp-p27质粒进行转化、扩增、抽提、酶切后进行琼脂糖凝胶电泳鉴定和测序;通过设计引物,进行pCR扩增后分别获取GFAp启动子和p27基因片段,依次交换入线性化表达载体GV269和p DC315-GFAp-EGFp载体,最终构建pDC315-GFAp-p27-EGFp;将其转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293细胞反复扩增数代后,进行纯化及滴度检测;转染星形胶质细胞后观察细胞生长和荧光表达情况;检测转染后星形胶质细胞细胞周期和凋亡比例、p27的表达情况。结果:经酶切鉴定和测序,成功鉴定真核表达载体pGFAp-IRES2-EGFp-p27;经pCR鉴定和测序,成功构建重组腺病毒过表达载体pDC315-GFAp-p27-EGFp;经包装后,Ad-GFAp-p27-EGFp可见EGFp表达和细胞致病效应,而且能够特异性地在星形胶质细胞中表达绿色荧光蛋白;经流式细胞仪分析,转染星形胶质细胞72 h后,与对照组相比,转染组处于S期的细胞比例下降,G1和G2期的细胞比例增高,凋亡比例增高(p<0.05);转染后第5天,星形胶质细胞中p27蛋白表达水平较对照组有明显升高(p<0.05)。结论:利用腺病毒包装系统AdMax成功构建了携带人GFAp启动子和p27基因的重组腺病毒过表达载体,其可以特异性转染星形胶质细胞过表达p27,对星形胶质细胞的生长增殖有明显抑制作用。