摘要：根据GenBank中人源大肠杆菌pila基因序列,用OLIGO6.0设计PCR引物,从鸭源致病性大肠杆菌GH1.2中扩增到pila基因并将其克隆至pMD18-T载体,经PCR、酶切和DNA测序鉴定后,将鸭源致病性大肠杆菌pila基因正向插入原核表达载体pET-32a(+)的BamHⅠ和HindⅢ位点间,成功构建了重组表达质粒pET-32a-pila。重组表达质粒pET-32a-pila转化表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导,表达出了大小约为36kD的pila重组蛋白。表达产物用镍柱亲和层析纯化,与等量弗氏佐剂混合制备pila重组蛋白疫苗,分别在1日龄、8日龄时两次对雏鸭进行免疫,二免后2周测定鸭血清中的ELISA抗体效价,并以109PFU同源菌株GH1.2攻毒,根据攻毒后鸭的死亡率、***分离率和各组织器官的病变等级来判定pila重组蛋白的免疫保护效果。结果pila重组蛋白免疫鸭的血清中ELISA抗体效价为1∶12800,全菌灭活苗免疫组的血清ELISA抗体效价为1∶200;同源菌株攻毒后,pila重组蛋白免疫保护组鸭的死亡率、***分离率和各组织器官的病变程度均比攻毒对照组下降且差异显著或极显著,与全菌灭活苗免组比较差异不显著。表明pila重组蛋白对同源菌株GH1.2的感染具有一定的保护效果。

摘要：根据已公布的鸡大肠埃希菌pila基因序列,在其保守区设计一对引物,以提取的3株鸡大肠埃希菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增,获得3个克隆片段。经序列测定和分析表明,3株克隆片段均含有Ⅰ型菌毛pila基因的全序列及完整的开放性阅读框架,片段大小为549bp,编码信号肽和结构蛋白;3株鸡大肠埃希菌分离菌株与其他菌株pila基因之间核苷酸同源性为87.25%～98.36%,氨基酸同源性为87.36%～98.35%;系统进化分析表明,大肠埃希菌各菌株之间的pila基因遗传相关性与其宿主来源及血清型之间没有显著的相关性;3株鸡大肠埃希菌I型菌毛间具有一定的结构相似性,并存在一定的共同抗原位点。

摘要：据GenBank中人源大肠杆菌pila基因序列，由Oligo 6．0设计一对引物，以提取的鸭源致病性大肠杆菌基因组为模板，进行PCR扩增，获得了5株鸭源致病性大肠杆菌的pila基因，序列测定和生物信息学分析表明：鸭源致病性大肠杆菌pila基因核苷酸序列长度为549bp，编码182aa，与人源、鸡源及猪源大肠杆菌pila基因之间核苷酸同源性为87．3％～100．0％，氨基酸同源性为87．5％～100．0％。对不同宿主来源大肠杆菌pila基因所编码蛋白的二级结构、亲水性、抗原性、抗原表位进行预测分析比较，结果显示Ⅰ型菌毛间具有一定的结构相似性，并存在一定的共同抗原位点；系统进化分析表明，各菌株之间的pila基因遗传相关性与其宿主来源及血清型之间没有严格的相关性。