摘要：【目的】通过对柔嫩艾美耳球虫(***)profilin基因进行原核表达和纯化,探明重组profilin蛋白对鸡的免疫保护效果。【方法】设计合成profilin基因特异性引物,提取***孢子化卵囊总RNA,反转录成cDNA,用PCR扩增获得profilin基因后连接至pET-32a(+)载体构建重组质粒pET-32a(+)-profilin,在IPTG诱导下进行表达并纯化。用重组profilin蛋白免疫雏鸡,随后经口服感染柔嫩艾美耳球虫卵囊,测定和统计雏鸡存活率、平均增重、血便计数、每克粪便卵囊数、卵囊产量、盲肠病变,计算抗球虫指数,观察盲肠组织病理学变化并测定血清中IL-2、IL-10、TNF-α、sIgA的水平以评估重组profilin蛋白的免疫保护效果。【结果】成功表达了重组profilin蛋白,大小为39.1 kDa。免疫保护试验表明:profilin重组蛋白组鸡只存活率、鸡只血便数和OPG相对于感染不免疫攻虫组显著减少(P0.05)。在攻虫后7 d,感染不免疫攻虫组血清中IL-2、TNF-α、IL-10以及sIgA水平相比于空白对照组均极显著升高(P<0.01),而重组蛋白免疫组血清中IL-2、TNF-α、IL-10以及sIgA水平极显著低于攻虫不免疫组(P<0.01)。【结论】柔嫩艾美耳球虫重组profilin蛋白可减少感染雏鸡的增重损失和卵囊排出,引发雏鸡体内的细胞免疫和体液免疫,具有一定的免疫保护效果。

摘要：通过生物信息学方法对多种植物性食物和花粉泛变应原proflin基因进行比对,利用其中的高度保守区域设计并合成简并引物,通过RT-PCR克隆得到一个新的大豆profilin基因(396bp,pI为5.21,MW为14,1kD),序列同源性分析发现该基因和已知的多种植物性食物、花粉变应原profilin有较高的同源性(>75%),因此认为其系大豆蛋白泛变应原profilin,命名为Gly m3.02,EMBL/GeneBank数据库登录号为DQ784852,这为进一步重组表达和抗原表位分析等奠定了实验基础。

摘要：目的克隆荔枝果实中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)同源基因。方法采用生物信息学方法对多个植物泛变应原基因进行序列同源性比对,根据序列保守区域设计并合成简并性引物,通过RT-PCR和3'-RACE技术克隆荔枝果实中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。结果获得了一个全长的新基因(689bp)。该基因开放阅读框为396个碱基,编码131个氨基酸残基,经分析该蛋白等电点为4.98,分子量约为14060。此序列已被GenBank收录,登陆号为DQ309464。序列分析结果显示所克隆到的基因与许多水果和花粉的泛变应原profilin基因有很高的同源性(与桦树和橡胶花粉泛变应原profilin的同源性分别为80%和84%,与桃子profilin的同源性为85%),因此认定其为泛变应原基因。结论从荔枝果实中成功地克隆出了一个泛变应原基因,为进一步的蛋白表达奠定了基础。

摘要：目的克隆并表达短穗鱼尾葵花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)。方法利用RT-PCR结合RACE技术克隆短穗鱼尾葵花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个短穗鱼尾葵花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western-blot检测其IgE结合活性。结果克隆获得了短穗鱼尾葵花粉profilin的全长基因,由608个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸。该序列编码的蛋白为小分子量酸性蛋白,等电点为4.52,相对分子质量约为14200。此序列已被GenBank收录,登陆号为EF173600。重组短穗鱼尾葵花粉profilin在大肠杆菌中高效的表达,进一步经Ni2+亲和层析柱纯化后经Western-blot检测具有良好的免疫学活性。结论成功地克隆和表达了短穗鱼尾葵花粉profilin,为短穗鱼尾葵花粉过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础。

摘要：目的:克隆并表达椰子花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)。方法:利用RT-PCR结合RACE技术克隆椰子花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个椰子花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性。结果:克隆获得了椰子花粉profilin的全长基因,由608个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸。经分析,这个序列编码的蛋白为小分子量酸性蛋白,等电点为4.61,分子量约为14 kD。此序列已被GeneBank收录,登陆号为EF173598。重组椰子花粉profilin在大肠杆菌中高效的表达和纯化后,经Western blot检测具有良好的免疫学活性。结论:成功地克隆和表达了椰子花粉profilin,为该花粉profilin用于椰子花粉过敏诊断和免疫治疗提供了理论依据。