摘要：根据日本kazusaDNA研究所收录的坛紫菜EST序列AV434021和AV433683设计引物,对坛紫菜配子体的RNA进行RT-PCR扩增,得到产物长度为480 bp。利用DNAstar、Clastal1.81等专业软件进行分析,结果表明,所得产物为紫菜叶绿体的psaa基因片段,其G+C含量为55.9%。G+C含量明显高于A+T的含量;对按核酸序列推导的蛋白序列进行二级结构和三级结构预测,该蛋白存在3个α螺旋和2个β折叠。

摘要：目的采用PCR检测肺炎链球菌(***)毒力基因psaa和ply,研究分析两个毒力基因的特异性,为***临床诊断提供依据。方法对广东省12家医疗机构诊断为***感染患者的654份标本,经过细菌培养和乳胶凝集试验筛选出575株,以psaa、ply基因核心区域序列设计合成扩增引物,以抽提的***分离株DNA为模板,采用常规聚合酶链反应(PCR)扩增目标基因psaa、ply片段,长度分别为838bp和209bp,调查分析不同来源标本的分离株psaa和ply基因检出率;采用乳胶凝集试验与多重PCR分型,比较两种结果中***菌株psaa和ply检出率差异,以及广东***主要血清型与非主要血清型菌株的psaa和ply检出率情况。结果经乳胶凝集试验鉴定为***的560株菌株中,psaa和ply基因检出率分别为78.21%和83.57%,ply基因检出率高于psaa基因,psaa基因阳性的***菌株,其ply基因均阳性;来源于血液和脑脊液标本的***分离株的psaa和ply基因检出率分别为93.18%和95.45%,脓液标本分离的***菌株psaa和ply基因检出率为100%。在荚膜肿胀反应和多重PCR检测为***可分型血清型菌株中,前者psaa和ply基因阳性率分别为93.90%和98.57%,后者为96.34%和98.31%;而在多重PCR检定为不可分型血清型菌株中,psaa和ply基因检出率分别为47.06%和57.84%,显著低于荚膜肿胀试验的68.59%和74.64%,但ply基因检出率也均比psaa高;可分型血清型中主要血清型菌株的psaa和ply基因检出率高于非主要血清型。结论广东地区***临床分离株中ply基因检出率比psaa高,保守性高,但其他链球菌亦能扩增出ply基因从而出现假阳性,因此,对于***菌株的鉴定,采用PCR同时扩增psaa和ply基因,并结合临床常规实验,鉴定更为可靠。此外,血液和脑脊液psaa和ply基因阳性率高可能与psaa和ply是***入侵血和脑的关键因子有关。