摘要：【目的】我国经济林树种板栗和杉木上的重要害螨一直被认为是同一种螨——针叶小爪螨,但针叶小爪螨的山东板栗种群和浙江杉木种群间存在生殖隔离,且生殖隔离并非由地理隔离和能调控寄主生殖的内共生菌引起,似乎二者已分化为2个独立的种。本研究目的是明确其成种原因,丰富物种形成理论。【方法】从之前做杂交试验时所采集的针叶小爪螨板栗和杉木种群中各随机取3头雌成螨,提取单头雌成螨的总DNA,使用根据其他小爪螨28S rdna两端保守序列设计的引物扩增28S rdna,扩增产物纯化后测序。比较2种群的28S rdna序列,并基于28S rdna序列构建小爪螨属系统发育树,结合已有研究分析两种群分化原因。【结果】每个种群的3个个体的28S rdna序列完全一致,无种群内变异。2种群的28S rdna序列一致性为98. 3%,遗传距离为1. 7%。在基于28S rdna序列构建的小爪螨属系统发育树上,浙江杉木种群与采自日本的日本柳杉上的本岛小爪螨亲缘关系最近,山东板栗种群与采自日本的日本栗上的栗小爪螨的亲缘关系最近。【结论】板栗和杉木上的叶螨并非由同一种叶螨因适应不同寄主植物分化而成,很可能是2个独立的物种。

摘要：目的 分析单种属——紫苏属各变种间rdna ITS区的序列以及存在的单核苷酸多态性（SNP）现象，设计出位点特异性PCR引物，用于紫苏属各变种间的分子标记鉴别。方法 对紫苏属各变种多个体的rdna ITS区全序列进行了准确测定，运用Clustral X1．8，MEGA3．0进行排序并进行SNP分析，从而设计出鉴别各变种的等位基因位点特异性PCR鉴别引物。结果 紫苏属各变种（紫苏、白苏、鸡冠苏和耳齿紫苏等）的rdna ITS区全序列共有615～618bp的长度，ITS1为233～235bp，5．8S为179bp，ITS2为203～204bp，GC含量为61．5％～61．9％。从rdna ITS区碱基变异的整体情况来看，紫苏属各变种间不仅在非编码的转录间隔区ITS1和ITS2内存在非编码区单核苷酸多态性（ncSNP），而且在保守的5．8S编码区内也存在3个位点的单核苷酸多态性，即编码区SNP（cSNP），所有的SNP均只具2等位多态性。5．8S区cSNP的出现与产生该变异的变种出现的显著形态差异关联。本文还利用这些SNP位点设计出了鉴别紫苏属各变种的位点特异性PCR引物，无需测序即可对紫苏属的原植物及“苏子”、“苏叶”等药材进行有效准确的分子鉴别。结论 紫苏属药用植物rdna ITS区存在的SNP可用作紫苏属各变种鉴别的分子标记。

摘要：对20余种细菌16Srdnas进行多序列比对与进化树分析,设计铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa,PA)荧光定量PCR(fluorescencequantitativePCR,FQ-PCR)特异性引物。提取PA基因组DNA,以特异性引物扩增16Srdna靶片段,并构建重组质粒pMDT-Pfr。将梯度稀释的pMDT-Pfr质粒作为模板,用于建立定量标准曲线。以SYBRGreenI荧光染料建立20μL反应体系,对不同浓度的PADNA样品进行FQ-PCR检测。同时,以金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、福氏志贺菌、变形杆菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌和结核杆菌的基因组DNA作阴性对照,验证FQ-PCR方法检测PA的特异性。结果显示,设计的FQ-PCR引物的靶向序列,仅对PA16Srdna有高度同源性;FQ-PCR方法检测PA,其灵敏度达3.6pg/μL的基因组DNA或(2.1×103±3.1×102)拷贝/μL的16Srdna基因,并且具有很强的特异性;从细菌DNA提取到FQ-PCR检测,可在2h左右完成PA鉴定。较传统的培养鉴定法而言,以16Srdna作为FQ-PCR靶基因快速检测PA,具有很好的研究价值与应用前景。

摘要：利用细菌16S rdna基因的通用引物对16个供试菌株进行PCR扩增,把扩增产物进行核苷酸序列测定。将获得的序列与GenBank中相关菌株的16S rdna序列进行同源性分析。以此设计出检测A.a.c的特异性引物,并利用最大简约法构建了16S rdna系统演化树。系统演化关系分析表明,6～9号供试菌株的16S rdna序列与A.a.c标准菌株仅有3个位点的差异,其同源性均在99.8%以上,在构建的系统演化树上,它们聚为同一个族群。利用设计的一对特异性引物(BFB64/65),对各供试菌株进行PCR检测,结果只有A.a.c相关菌株产生扩增条带,产物大小与预期一致。

摘要：鸭疫里默氏菌感染是危害养鸭业的主要疾病，用表型指标鉴定鸭疫里默氏菌存在不足，因此有必要建立检测该菌的种特异性PCR法。利用已登录的鸭疫里默氏菌、大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌的16S rdna基因序列，设计了一对鸭疫里默氏菌16S rdna基因的特异性引物190f和843r，分别以基因组DNA和菌落提取液为模板，从1-19型鸭疫里默氏菌参考菌株和代表亚型、变异株和可能新型的国内分离株共26株细菌中均扩增出大小为654bp的特异性片段，而扩增鸭大肠杆菌、鸭沙门氏菌和禽多杀性巴氏杆菌等感染鸭的常见细菌的结果均呈阴性。分别将鸭疫里默氏菌基因组DNA和菌落提取液进行10倍梯度稀释，基因组DNA的最小检出量为50pg，菌落最小检出量为15CFU／mL。结果说明，该PCR法具有较好的特异性和敏感性，可用于快速鉴定鸭疫里默氏菌。

摘要：【目的】利用分子生物学方法对一株甲烷氧化菌Methylosinus trichosporium IMV3011中的16S rdna和溶解性甲烷单加氧酶基因序列进行分析并探索其进化分类地位。【方法】利用基因数据库已有的基因序列信息,设计PCR扩增引物和基因测序引物,对溶解性甲烷单加氧酶基因和16S rdna进行扩增和测序,并进行溶解性甲烷单加氧酶的6个基因和氨基酸序列与同类菌株的相应序列进行联配分析。【结果】获得了全长为5319bp甲烷单加氧酶基因序列和长度为1290bp的16S rdna序列。该菌株与Methylosinus trichosporium OB3b中相对应基因的同一性是99.0%～82.7%,MMOX氨基酸序列的同一性为99.4%～81.8%,相似性为99.8%～89.2%。基于以上分析表明MMOX组分有很高的序列保守性,特别是在活性中心区域。【结论】菌株IMV3011属于甲基弯菌属,最近似的菌株是Methylosinus trichosporium OB3b。

摘要：蜘蛛香(Valeriana jatamansi)在我国西南和东北地区作为一种传统的草药用来治疗消化不良和风湿病。蜘蛛香在化学活性成分和药效方面都与缬草属其他药用植物存在较大差别。为了研究缬草属植物之间的亲缘关系以及寻找一种能够有效方便地将蜘蛛香与其他缬草属植物区别开的方法,本文对5种缬草属药用植物的5S rdna序列进行了扩增和测序。测序的结果表明扩增的5S rdna片断,长度在307bp到355bp之间。系统发育分析表明,在所测试的5种缬草属植物中,中国缬草(***)与宽叶缬草(*** ***)亲缘关系最近,而长序缬草(***)与其他4种材料的遗传距离最远。根据蜘蛛香5S rdna序列的SNP位点设计了6条诊断型引物,通过等位基因特异PCR(amplification refractory mutation system,ARMS)分析,其中一条引物可以将蜘蛛香与其他4种缬草属植物区别开。此外,利用这条特异引物,ARMS技术还能够成功地鉴别出复方中药中是否含有蜘蛛香。由此可见,这种方法不仅可以用以鉴别蜘蛛香的基原植物,同时还能用于蜘蛛香商业产品的鉴别。

摘要：根据酵母整合质粒的设计要求,PCR扩增特定的2.2kbrdna片段,并以此替换酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)整合载体YIp5的URA3片段;在此基础上,引入G418抗性基因KanMX和酵母磷酸甘油激酶(phosphoglyceratekinase,PGK)组成型强启动子和终止子序列(PGKpt),构建适合酿酒酵母工业菌株高拷贝整合表达载体pYMIKP.以细菌木糖异构酶(xyloseisomerase,XI)基因xylA为目标基因,通过载体pYMIKP引入到酵母工业菌株NAN27中.酵母转化子在非选择培养条件下,连续生长50世代质粒稳定性为99.72%.目标基因高拷贝重组菌的木糖异构酶比酶活是对照菌株的67.2倍,达到0.672Umg蛋白,实现了外源基因在酿酒酵母工业菌株中的稳定高效表达.

摘要：根据酵母整合质粒的设计要求,PCR扩增2.2 kb rdna片段,导入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)整合载体pYD1中,设计并合成适合在酵母中表达的鲑鱼降钙素(Salmon Calcitonin),以此为目标基因,构建适合酿酒酵母多拷贝整合的表达载体p-r-sCT。通过载体p-r-sCT引入到酿酒酵母菌株EBY100中,得到酵母重组菌株yAGA2-r-sCT。流式细胞检测结果表明,目标基因鲑鱼降钙素在重组菌株的yAGA2-r-sCT中得到了表达,实现了外源基因在酿酒酵母菌株中的稳定表达。

摘要：目的建立一种非培养的、以16s rdna序列分析为基础的咽喉标本细菌筛查技术。方法提取标本中的总DNA,针对细菌16s rdna保守区设计通用引物进行PCR扩增、克隆、测序,将获得的16s rdna序列与数据库中的发表序列进行比对,分析克隆群中细菌的种类和比例。结果16s rdna序列分析方法,能够对正常成人的咽部标本进行分析;在咽部标本中发现了不动杆菌、真杆菌、流感嗜血杆菌等;在这些细菌中,既有能够常规分离培养的细菌,也有常规难以分离培养的细菌。结论成功建立了咽部标本的16s rdna序列分析方法;通过分析正常成人咽部标本,得到正常人体咽部菌群的种类和比例,发现了多种不能常规分离培养的细菌。