摘要：为提高转基因盐藻的表达效率,利用基因组步行方法和巢式PCR,从盐藻中克隆了1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco)的小亚基基因rbcs的5′上游调控序列,并对其进行序列分析和转基因功能分析。采用DraI、EcoR V、PvuII和StuI4种平端限制内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建基因组步行文库GWL1、GWL2、GWL3和GWL4;设计特异引物从这4种文库中扩增rbcs基因的5′上游调控序列。在GWL1、GWL4中分别扩增出约1.2kb的片段。对该序列的分析表明,它的3′端与已知盐藻rbcscDNA的5′端序列完全一致,说明是该基因的5′端上游区,并且包含多个与转录调控有关的保守序列(如TATA-box,CAAT-box),富含GT的重复序列。此序列EcoR I下游的片段与除草剂抗性基因bar相融合,构建表达载体,电击法转化盐藻。通过对转化藻株的抗性筛选以及PCR和Southern blot检测,表明该区域能驱动外源基因bar在转基因盐藻中的表达,推断是盐藻rbcs基因的启动子调控区。

摘要：应用双向电泳结合液相色谱-质谱联用(LC-MS)分析,筛选得到干旱胁迫下白菜型冬油菜与光合作用相关差异蛋白质RuBisCo小亚基。根据已发表白菜型油菜(Brassicarapa)RuBisCo亚基rbcL和rbcs保守序列设计引物,采用RT-PCR扩增陇油7号的cDNA,获得rbcL和rbcs基因开放阅读框,长度分别为1095 bp和549 bp,编码364和181个氨基酸的蛋白质。生物信息学分析结果显示, rbcL与大白菜(Brassica rapa subsp. chinensis)的蛋白质同源性达到99%以上,其保守序列属于RuBisCoLarge超家族,该蛋白质理论相对分子量及等电点分别为40.29kDa和6.70,不稳定指数(instabilityindex,II>40为不稳定蛋白质)为41.67,属于不稳定蛋白;脂融指数(aliphaticindex)为83.63,平均亲水性值(grand average of hydropathicity)为-0.232,属于亲水性蛋白质;二级结构包括38.74%α-螺旋(alpha helix)、10.99%延伸链(extendedstrand)及50.27%自由卷曲(randomcoil);三级结构具有5个不同的活性口袋。rbcs与甘蓝(Brassicaoleracea)蛋白质同源性达到99%,其保守序列具有rbcs超家族和RuBisCo Small Like超家族,理论相对分子量为20.32 kDa,理论等电点为8.23,不稳定指数为33.66,属于稳定蛋白质;脂融指数为74.86,平均亲水性值为-0.142,属于亲水性蛋白质;二级结构包括16.02%α-螺旋、28.73%的延伸链及55.25%自由卷曲;三级结构具有4个不同的活性口袋。实时荧光定量和半定量分析显示,干旱胁迫下,白菜型冬油菜叶片rbcL和rbcs基因表达量下调是光合作用下降的原因。并且,冬油菜叶片Pn下降与RuBPCase表达抑制和活性降低有关,非气孔限制是Pn下降的主要因素。

摘要：以2株蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)F-9和820为实验材料,根据已知绿藻rbcs基因设计简并引物,分别克隆到2条245bp的cDNA片段,以此片段为基础使用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了2条长度分别为861bp和907bp的rbcs基因。序列分析表明,蛋白核小球藻F-9和820的rbcs分别编码181和184个氨基酸,编码区具有与高等植物rbcs保守序列YYDGRYWTMWKLPMFG相类似的结构,起始密码子附近有Kozak保守序列(A/GXXATGG),3′非翻译区有加尾信号TGTAA。同源性分析结果表明,F-9与蛋白核小球藻(GenBank登录号BAE48226)的相似性最高(91%),而F-9与820、F-9和普通小球藻(***)的相似性分别为64%和50%。这2条rbcs基因与其他绿藻和高等植物也表现了广泛的同源性,但相似性不高。该研究旨在为rbcs基因的功能和表达研究奠定基础。

摘要：根据NCBI中发表的大豆Rubisco小亚基基因(rbcs)序列(AF303939-1)设计特异引物,以吉农13大豆为实验材料,采用Trizol法提取叶片总RNA,通过RT-PCR克隆大豆rbcs的cDNA。将该基因与原核表达载体pET-30a(+)连接,转化大肠杆菌*** BL21感受态细胞,双酶切鉴定后筛选阳性克隆,测序结果显示:rbcs全长696bp,其中开放阅读框为537bp,编码178个氨基酸;选择含大豆rbcs cDNA阳性克隆菌液IPTG诱导,经SDSPAGE分析,诱导表达出分子量为29.1kDa的融合蛋白,表达产物大小与预计理论值相符。诱导7h蛋白表达量最高,为64.15%。

摘要：以天山雪莲(*** *** Kir.)为材料,根据已获得的天山雪莲1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基基因组序列设计引物,采用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)和高效TAIL-PCR(hiTAIL-PCR)扩增到rbcs基因5′上游启动子序列,长为1 668bp。用PlantCare和PLACE软件序列分析表明,该序列具有启动子的基本元件TATA-box、CA AT-box,包含多个胁迫诱导元件,如光诱导元件、赤霉素、低温诱导元件,昼夜节律调控元件等。构建pBI-Psikrbcs-GUS植物表达载体,并成功将其转化进入农杆菌。sikrbcs基因启动子的克隆与分析为进一步研究雪莲1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基基因的表达调控奠定了基础。

摘要：目的:克隆杜氏盐藻1,5 -二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)小亚基rbcscDNA片段。方法:根据 莱茵衣藻、团藻、玉米等真核生物的RuBisCO小亚基rbcs氨基酸的高度保守序列ETRSYLPP和MNKLPMFG,设计 一对简并引物,采用RT PCR方法及该简并引物克隆杜氏盐藻rbcscDNA。PCR产物经T A克隆与T vector相连, 转化大肠杆菌JM109,随机挑取数个菌落,筛选鉴定,对阳性克隆进行测序分析。将测序结果推导成氨基酸序列进 行同源性比较。结果:得到的cDNA长度为209bp,编码69个氨基酸。推导的氨基酸序列与团藻、Chloromonassp. ANT3、衣藻、伞藻、菠菜、玉米的rbcs相比较,同源性分别为85%、84%、82%、76%、70%、69%。结论:所克隆的序 列为杜氏盐藻rbcscDNA片段。

摘要：根据莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、团藻(Volvox carteri)、伞藻(Acetabularia cliftonii)等生物的1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)的小亚基rbcs基因氨基酸的高度保守序列,设计一对简并引物,进行RT-PCR.209bp的PCR产物经测序分析及进行氨基酸序列同源性比对,表明克隆的序列为盐藻rbcs基因的cDNA片段.根据该序列信息,采用RACE(rapid amplification of cDNA ends)的方法扩增其5′上游未知区和3′下游未知区.5′RACE得到的cDNA长度为约300bp,3′RACE得到的长度约380bp.三段序列拼接后cDNA全长为878bp,其中开放读码框包括190个氨基酸.此cDNA序列,推导成氨基酸序列与已知物种的rbcs基因相比对,同源性分别为***78%,***75%,***67%,据此可推断所克隆的序列为盐藻RuBisCO的小亚基cDNA序列,GenBank收录号为AY739272.

摘要：根据Genbank公布的菊芋1-SST基因序列设计并合成特异引物FP1、FP2。提取菊芋RNA并进行反转录,克隆蔗糖:蔗糖果糖基转移酶(1-SST)基因,测序结果表明与菊芋1-SST的序列同源性达到100%。将在茎杆中特异高表达的连接有转运肽序列的番茄rbcs启动子和1-SST基因连接到载体pCBI上,成功构建植物表达载体pCBISR,并导入根癌农杆菌EHA105菌株。

摘要：背景 采用高浓度甘油方法(HGM)或低浓度甘油方法(LGM)rbcs能冰冻保存。解冻后 24小时的使用期限阻碍了冰冻rbcs的使用。一种封闭的洗涤系统(ACP 215)可以解决这个问题。研究设计和方法 作者比较高浓度(40％)与低浓度(19％)甘油在有和没有冰冻保存(HGM置于-80℃,LGM置于-196℃)条件下采用这种封闭的洗涤系统除去甘油及解冻后置于SAGM4℃于保存期内在体外对rbcs质量的影响。

摘要：危重症患儿输注红细胞与继发谵妄的关系/Association between transfusion of rbcs and subsequent development ofdelirium in critically ill *** ME,Goel R,Feinstein S,et *** Crit Care Med,2018,19(10):925-929.关键词红细胞输注;谵妄;重症监护;儿科;儿童摘要目的了解一群危重症患儿输注rbcs与继发谵妄的时间关系。设计前瞻性队列研究内嵌套回顾性队列研究。场所城市学院型三级医疗中心PICU。对象2014年9月至2015年8月间所有连续住院患儿。干预措施患儿于PICU住院期间每天接受两次谵妄筛查。