摘要：目的 :寻找具有更强抗肿瘤活性和 (或 )较低毒副作用的 tnfα突变蛋白。 方法 :应用巨引物二轮 PCR技术对rh- tnfα的第 80、90和 92位氨基酸编码的密码子进行定点突变 ,经过 DNA序列测定证实 DNA突变准确后 ,将突变基因的c DNA插入 p BL载体 ,转化大肠杆菌 DH5α,获得表达 rh- tnfα- D3a的工程菌。 结果 :经巨引物二轮 PCR获得表达 tnfα突变蛋白的基因突变 ,经序列测定结果与设计一致 ,重组蛋白表达量占细菌总蛋白 18.0 % ,大部分为可溶性 ,占 rh- tnfα- D3a总量的 6 0 %以上。重组蛋白经纯化 ,纯度 >98%。 rh- tnfα- D3a对 L 92 9细胞表现出较高的细胞毒性 ,比活性大于 5× 10 8IU / mg。与野生型的 rh- tnfα相比 ,rh- tnfα- D3a的毒性降低为野生型的 1/ 10 ,同时其保留了 tnfα的抗肿瘤活性。 结论 :rh- tnf-αD3a是一个毒性较低 。