摘要：ribozyme是具有催化RNA切割反应功能的RNA,它可以有效地序列特异性地切割RNA。最近,ribozyme的一般结构已经被证实,因此能够设计并人工合成ribozyme,通过切割破坏RNA,阻断其功能,并抑制基因表达,包括抑制病毒的基因表达,从而有效地阻止病毒的复制和繁殖。这是近年来继反义RNA之后发现的又一个抑制基因表达的有力工具,它开辟了分子生物学的一个新领域,具有很大的潜在应用价值,因此它一出现即引起各国学者的极大兴趣。

摘要：针对端粒酶RNA组分模板区设计合成锤头状端粒酶核酶（teloRZ）,构建了teloRZ基因体外转录质粒PSPT19-teloRZ和真核表达质粒PXJ-neo-teloRZ.用T7/SP6体外转录系统检测了teloRZ对端粒酶RNA组分的体外切割效率,达60％左右.用脂质体介导法,将PXJ-neo-teloRZ导入HeLa细胞和裸鼠移植瘤,结果使HeLa细胞端粒酶活性降至对照细胞的11％～12.5％,细胞生长速度明显变慢,传至19～20代时出现95％凋亡.裸鼠移植瘤注射PXJ-neo-teloRZ　14d后,端粒酶活性下降69％,抑瘤率达62％.实验表明,该核酶可望成为有效的端粒酶抑制剂,在肿瘤治疗中发挥作用.

摘要：锤头结构ribozyme是已知一类链长较短并易于设计的ribozyme.我们针对苜蓿夜蛾核多角体病毒(AcNPV)多角体蛋白mRNA片段而设计的ribozyme经体外切割试验证明是有效的.利用这一模型我们研究了ribozyme与底物的相互作用对于切割反应的影响.结果指出ribozyme与底物的相互作用越强则反应的最适温度(T_(opt))越高,反之亦然;将ribozyme与底物的配对由RNA·RNA配对改为RNA·DNA配对能使它们的相互作用减弱.同时,我们观察到某些反应的T_(opt)的降低比T_m降低大得多.从动力学分析看,T_(opt)

摘要：本文针对苜蓿夜蛾Autographa californica核多角体病毒的多角体蛋白mRNA设计并合成了两个ribozyme。体外实验结果表明它们都能准确、高效地切割体外转录得到的mRNA片段。实验表明,在一定的范围内,切割百分率随着温度的升高、时间的延长和ribozyme浓度的提高而增加。Ca^(2+)、Mn^(2+)可以代替Mg^(2+)作为ribozyme切割反应所必需的二价金属离子。

摘要：小鼠腺苷脱氨酶ｍＲＮＡ经计算机分析，包括：ｒｉｂｏｚｙｍｅ切点位置选择，二级结构预测，基因生物学功能和基因同源性分析，筛选出四个锤头结构ｒｉｂｏｚｙｍｅ．结果表明上述ｒｉｂｏｚｙｍｅ底物切点两翼碱基形成发夹结构，切点位于单链环区，切点所在基因片段位于该基因生物功能区内，并同已知小鼠其它基因不同源．

摘要：本文报道根据ribozyme的作用模式、设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯纺锤形块茎类病毒(PSTV)正链和负链RNA的ribozyme基因。以转录的PSTV正链及负链RNA作为底物与转录的ribozyme RNA一起保温检测ribozyme的体外切割活性。实验结果表明,当在50℃保温时,特异性切割PSTV正链及负链的ribozyme在体外具有相当高的特异性切割活性;并且当在25℃保温时,ribozyme仍具有相当的切割活性。在此基础上,正试图将ribozyme基因导入马铃薯植株以检测其体内活性。

摘要：现有知识所知道的锤头状ribozyme结构中,剪切是在特殊位点的3′侧发生,我们将含GTΨ的酵母丙氨酸tRNA 3′半分子(40聚)作为底物,按Haseloff-Gerlach锤头结构模型设计了一个38聚的ribozyme分子。在镁离子存在的条件下,GTΨ的3′侧发生预期的体外剪切反应。反应的米氏动力学参数为:K_m:6.7μmol/L,k_(cat):3.4×10^(-3)/min。与此同时,合成了一个17聚的底物类似物,仅以GUU代替上述的GTΨ序列。恒态动力学分析表明,两底物的K_m值大致相同,但k_(cat)值相差达294倍。实验表明,修饰核苷酸Ψ可以是ribozyme锤头结构中的剪切位点,但具有很低的k_(cat)。

摘要：目的:枯草杆菌的包装RNA分子pRNA是新型纳米分子载体,将其同锤头型核酶ribozyme重组可以构建结构稳定、能进入细胞、主动识别结合和剪切基因RNA的pRNA-ribozyme。由于目前100 nt以上的RNA分子采用化学合成制备较为困难,实验采用基因重组构建并体外转录制备170 nt的pRNA-ribozyme。方法:依据pRNA序列和ribozyme分子序列,采用PCR扩增和克隆重组,将pRNA-ribozyme按照顺式连接开放式结构、和ribozyme嵌入pRNA成自身环化闭合型结构,制备其DNA质粒;再在体外转录制备pRNA-ribozyme分子。结果:体外生物合成制备pRNA-ribozyme顺式连接开放式结构、和ribozyme嵌入pRNA成自身环化闭合型结构pRNA-ribozyme分子,它们能通过自身正确折叠形成聚合体结构。体外鉴定pRNA-ribozyme对其靶mRNA均具有切割降解活性,为pRNA-ribozyme分子的细胞内应用和在胞内表达应用打下基础。

摘要：用自行设计的能专一切割家蚕核多角体病毒即刻早期蛋白（BmNPVIE）mRNA上三个位点的三联体ribozyme－R426（由R47，R208和R687三个ribozyme串联而成），构建了在家蚕细胞中瞬时表达的质粒pGL2Rz。为了检测和筛选的方便，在BmNPVIE启动子和R426之间装入了荧光素酶基因。细胞实验的结果表明，Bm－N细胞转染36小时，荧光素酶基因的表达已达最高峰；细胞中抽提的R426的体外切割反应表明，单体R47和R208具有切割活性，而检测不出R687的切割条带。与体外转录的R426比较，细胞中抽提出的R426的活性明显降低。对表达R426的细胞进行野生型病毒BmNPV的感染实验表明，与仅表达荧光素酶基因的对照比较，细胞中形成的多角体减少约30％。

摘要：恶性肿瘤是严重危害人类健康的疾病,死亡率极高。50％病人可以手术和放疗,另外50％病人因不能手术和放疗而需化疗。然而这些病人常化疗失败,其主要原因是肿瘤产生耐药性。人恶性肿瘤中MDR1基因及其产物P-糖蛋白(Pgp)表达非常普遍,约50％的肿瘤在治疗前即有MDR1基因表达,治疗后MDR1基因表达的百分比更高,同时肿瘤细胞对原先敏感的抗癌药物也不敏感,即产生了耐药性。ribozyme是一类具有RNA限制性内酶活性的RNA分子,可以识别RNA序列中的GUX(X为A,C,U)序列并进行有效切割,其中一种具有锤头结构(hammerhead)模型特征,根据此原理人工设计的ribozyme可以特异地定点切割靶RNA分子,阻断蛋白质表达。我们曾发现MDR1反义RNA可以明显抑制Pgp表达,但没有完全抑制。本研究利用逆转病毒介导的MDR1基因特异ribozyme,抑制人肺癌耐药细胞Pgp表达,探讨逆转其耐药性的可能性。