摘要：本文简要介绍了各类ribozyme的催化机制,ribozyme的人工设计及其在医学上的应用前景。

摘要：应用计算机分析了抗ＨＰＶ１６Ｅ７－ｒｉｂｏｚｙｍｅ的体外切割反应结果，发现ｒｉｂｏｚｙｍｅ和靶ＲＮＡ的二级结构及其能量变化能影响ｒｉｂｏｚｙｍｅ的切割活性。根据锤头结构ｒｉｂｏｚｙｍｅ的能量变化模型，对抗ＨＰＶ１６Ｅ７－ｒｉｂｏｚｙｍｅ和靶ＲＮＡ在痘苗表达体系及稳定表达体系中的相互作用，进行计算机模拟分析。结果表明，计算机分析ｒｉｂｏｚｙｍｅ和靶ＲＮＡ在细胞内的相互作用，可以指导ｒｉｂｏｚｙｍｅ的设计和在体内的应用研究。

摘要：利用ribozyme专一水解RNA的特性,设计ribozyme定点切割基因表达的中间物mRNA以及病毒RNA,可以阻断基因表达和抑制病毒复制,从而达到治病和防病的目的。自1990年以来,利用ribozyme技术,已经对爱滋病、肿瘤等疾病进行了大量的研究。本文着重介绍ribozyme体内阻断基因表达的应用和一些规律性问题。

摘要：ribozyme具有催化切割其他RNA分子的能力,不少研究者针对这一特点,试图通过人工设计的ribozyme破坏致病的RNA分子,在爱滋病、慢性肝炎和癌症等疾病的治疗上做了大量探索性的工作,对存在的许多问题提出了相应的解决方法。这方面的研究预示着ribozyme在临床治疗上的应用前景。

摘要：80年代初,由美国科学家Cech和Altman发现了ribozyme(核酶),随着人类基因工程研究的深入,部分临床实验室工作者和基础科学研究人员开始注意到ribozyme在基因治疗中的应用潜力。近几年来,人们利用ribozyme可以特异性地切割靶RNA序列的特点,设计适合的ribozyme阻断特定基因的表达,相继对艾滋病、肿瘤、生殖系统疾病、肝炎、白血病、移植排斥反应等疾病进行了大量研究。试验结果表明ribozyme作为基因治疗的一种方法有着广阔的应用前景和极大的临床实用价值。

摘要：目的 :设计切割ki-rasG12V mRNA的特异性ribozyme(Rz2 17) ,明确其对癌基因ki-rasG12VmRNA的细胞内外切割活性 ,为以ki-rasG12VmRNA为特异性靶分子的基因治疗及癌基因ki-ras的功能研究提拱一种新的途径。方法 :依Symons总结的“锤头结构”原理 ,设计一种能特异性切割ki-rasG12VmRNA的ribozyme ,利用DNA重组技术构建ki-rasG12V外显子 1和ri-bozymeRz2l7的体外转录质粒及ribozymeRz2 17的真核表达质粒 ,体外转录获得ribozymeRz2 17及ki-rasG12V外显子 1mRNA ,在含Mg2 + 溶液中ribozymeRz2 17对其靶RNA分子进行切割。以RT -PCR对转染ribozymeRz2 17真核表达质粒的细胞ki-rasG12VmRNA进行半定量分析。结果 :ki-rasG12V外显子 1体外转录mRNA分子 ,能被ribozymeRz2 17定点切割而野生型ki-ras外显子 1体外转录mRNA则不被切割 ;转染ribozymeRz2 17的胰癌细胞ki-rasG12VmRNA含量减少 ,而转染ri bozymeRz2 17的肝癌细胞其内源性ki-rasmRNA含量无明显变化。结论 :ribozymeRz2 17无论在细胞内外均能剪切突变型ki-rasmRNA(G12V)而且其切割作用为突变型ki-rasG12VmRNA特异性的。

摘要：根据猪瘟病毒（ＨＣＶ）基因组ＲＮＡ的序列和Ｒｉｂｏｚｙｍｅ的结构特点，设计并合成了针对ＨＣＶ基因组Ｐ（８０）编码区长为５６碱基对（ｂｐ）的榔头状ＨＣＶＲｉｂｏｚｙｍｅ（ＨＲ）基因。将此基因插入质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ中，转化ＸＬ１－ｂｌｕｅ细胞，经限制性内切酶鉴定，获得６个阳性克隆ｐＢＨＲ。可用于ＨＣＶ抗性的体外表达研究。又将羊金属巯因启动子（ｏＭＴ－ｐｒｏｍｏｔｅｒ）插入ｐＢＨＲ，构建重组质粒ｐｏＭＨＲ，经序列分析插入的ＨＲ基因序列和方向与设计相符。再将ｏＭＴＨＲ基因插入质粒ｐｍＭＴ中，最终构成ｐＭＨＲ表达载体，经酶切分析和聚合酶链式反应（ＰＣＲ）鉴定表为此表达载体中确含ｏＭＴ启动子和ＨＣＶ－Ｒｉｂｏｚｙｍｅ基因，可用于ＨＣＶ抗性的体内表达研究。

摘要：目的:设计能特异性切割人癌基因c-erbB-2 mRNA的核酶(ribozyme).方法:根据Symons的“锤头结构”,以人癌基因c-erbB-2 mRNA为靶RNA,用计算机对其可能为核酶切割的位点进行分析以寻找最佳切点;对底物及核酶的二级结构进行预测.结果:c-erbB-2mRNA第2428～2776位和第2820～3004位之间的二级结构相对稳定,是重要的生物学功能区,因而也是核酶理想的攻击区域.该区第2438,2477,2751位是核酶的最佳切割位点.针对这三个位点设计了三个核酶并分别命名为RZ1,RZ2,RZ3.计算机模拟显示,它们均能与底物切点两翼碱基结合而形成锤头状结构.通过计算机基因库检索,在已知人基因中,其它基因的mRNA均不含有上述三个核酶切点两翼碱基的同源序列.结论:并非所有的GUX或CUX均可作为核酶的理想切割位点,c-erbB-2mRNA上第2438,2477,2751位可能是核酶的最佳切割位点.

摘要：选择小鼠腺苷脱氨酶ｍＲＮＡ做为靶ＲＮＡ系统，采用计算机辅助设计，人工设计了能特异性定点切割小鼠腺苷脱氨酶ｍＲＮＡＲｉｂｏｚｙｍｅ，命名为ＲＤＡＲｂ２６２，ＡＤＡＲｂ４５５，ＡＤＡＲｂ５８３和ＡＤＡＲｂ８６２，它们分别切割靶ＲＮＡ上不同切点。通过计算机基因库检索，在已知上鼠基因中，无其它基因ｍＲＮＡ含有靶ＲＮＡ切点两翼碱基序列的同源序列。经人工合成和仁外转录得到了Ｒｉｂｏｚｙｍｅ分子和靶ＲＮＡ分子。

摘要：ribozyme是一类具有生物催化功能的RNA,它能定点切割RNA靶分子,从而达到有效地阻断基因表达的目的。本文依“锤头结构”原理设计合成了一个38个核苷酸的ribozyme,能在体外定点切割甲型肝炎病毒的RNA片段(链长为123核苷酸残基,切削点对应于甲肝病毒RNA的559位)。测定了切割反应与温度、ribozyme浓度和底物浓度的关系,其Km和kcat分别为0.63μmol/L和0.12min^(-1)。Mg^(2+)或Ca^(2+)均可作为参与该催化反应所必需的金属离子。