摘要：脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy, SMA)的致病基因是运动神经元存活(survival of motor neuron,SMN)基因。本研究旨在利用CRISPR/Cas9系统对兔(Oryctolagus cuniculus)SMN基因外显子1上设计的4条sgrna进行效率分析。采用生物信息学分析SMN基因的cDNA序列,通过PCR技术克隆出其cDNA序列;针对SMN基因外显子1设计4条sgrna,分别为sgrna1-1、sgrna1-2、sgrna1-3、sgrna1-4;构建基因敲除载体pX459-sgrna和双荧光报告载体RGS-sgrna,共转染至293 T细胞中,24 h后观察荧光基因表达情况,并通过流式细胞仪分析4个sgrna效率。结果表明,SMN基因CDS区核苷酸序列保守性较高(约80%),cDNA长为888 bp,编码295个氨基酸;荧光检测和流式细胞仪分析可知,外显子1上sgrna的切割效率由高到低分别为sgrna1-2 (57.1%)、sgrna1-3 (42.0%)、sgrna1-1 (33.5%)、sgrna1-4 (0.1%)。CRISPR/Cas9基因编辑技术可高效编辑兔子的SMN基因,为构建兔SMA疾病模型奠定基础。