摘要：Drug resistance is a great challenge in cancer therapy using chemotherapeutic agents. Administration of these drugs with sirna is an efficacious strategy in this battle. Here, the present study tried to incorporate sirna and paclitaxel(PTX) simultaneously into a novel nanocarrier. The selectivity of carrier to target cancer tissues was optimized through conjugation of folic acid(FA) and glucose(Glu) onto its surface. The structure of nanocarrier was formed from ternary magnetic copolymers based on FeCopolyethyleneimine(FeCo-PEI) nanoparticles and polylactic acid-polyethylene glycol(PLA-PEG) gene delivery system. Biocompatibility of FeCo-PEI-PLA-PEG-FA(NPsA), FeCo-PEI-PLA-PEG-Glu(NPsB) and FeCo-PEI-PLA-PEG-FA/Glu(NPsAB) nanoparticles and also influence of PTX-loaded nanoparticles on in vitro cytotoxicity were examined using MTT assay. Besides, sirna-FAM internalization was investigated by fluorescence microscopy. The results showed the blank nanoparticles were significantly less cytotoxic at various concentrations. Meanwhile, sirna-FAM/PTX encapsulated nanoparticles exhibited significant anticancer activity against MCF-7 and BT-474 cell lines. NPsAB/sirna/PTX nanoparticles showed greater effects on MCF-7 and BT-474 cells viability than NPsA/sirna/PTX and NPsB/sirna/***, they induced significantly higher anticancer effects on cancer cells compared with NPsA/sirna/PTX and NPsB/sirna/PTX due to their multi-targeted properties using FA and Glu. We concluded that NPsAB nanoparticles have a great potential for co-delivery of both drugs and genes for use in gene therapy and chemotherapy.

摘要：NA干涉 (RNAinterference ,RNAi)是一种特异性地导致转录后基因沉默的现象 ,在哺乳动物细胞中小分子干扰RNA双链体 (smallinterferingRNAduplexes ,sirnaduplexes)可以有效地诱导RNAi现象 ,为一些疾病的治疗开辟了新的途径 .针对SARS冠状病毒 (SARScoronavirus ,SARS CoV)中编码 5个主要蛋白质的基因 ,用生物信息学的方法设计了3 48条候选sirna靶标 .在理论上 ,相应的sirna双链体能特异地抑制SARS CoV靶基因的表达 ,同时不会影响人体细胞基因的正常表达 。

摘要：针对甲型流感病毒H1N1基因,从RNAi的角度出发,采用多特征融合的方法,进行sirna预测。对2009年的46株病毒序列的PA片段进行分析,从经过序列分析所获得的众多靶序列中,采用结构分析手段对靶序列进行筛选,获得较易干扰的靶序列及设计出相应的sirna。2009年爆发的H1N1病毒,序列保守性高,靶序列一致性高,结构保守性高。该方法可以有效选择可能的靶序列,并在此基础上进一步筛选,以获得少量较易干扰的靶序列,该方法为复杂序列sirna的设计提供了新思路,对sirna的优化设计有指导意义,有助于利用RNAi进行H1N1治疗的后续研究。

摘要：sirna介导的RNA干扰技术已经成为基因功能研究和开展疾病治疗的有用工具.近年发现,sirna在哺乳动物体内可激活天然免疫系统,诱导干扰素等炎症因子的分泌,并且可非特异性抑制某些非靶基因的表达,有可能极大限制RNA干扰技术的应用.进行高效特异性sirna的设计和修饰,以保持或者增强sirna的特异性靶基因沉默作用,又消除sirna对机体的非靶免疫副作用,成为使sirna安全有效应用于临床治疗的关键.

摘要：RNA干扰(RNA interference,RNAi)是生物界普遍存在的一种抵御外来基因和病毒感染的保守进化机制,其本质是sirna与靶向mRNA特异结合、并由RISC介导其降解,从而阻止mRNA的翻译,导致基因沉默。因此, RNAi可以作为基因功能研究、基因治疗等的新工具。但是,随机设计的sirna之间沉默效应差别很大。如何针对靶基因设计特异、高效的sirna就成了一个关键的问题。文章对sirna设计原则的研究进展进行了总结论述。

摘要：滑膜间质干细胞(SMSCs)与其他来源的间质干细胞相比,具有更强的生长能力和更大的软骨分化潜力.但由于SMSCs固有地表达I型胶原,这将会大大损害再生软骨的整体质量.为解决此问题,文中首先设计了可抑制I型胶原表达的shRNA,并将其构建到腺病毒载体上.接着通过Pac I酶切反应,使重组腺病毒载体线性化并通过脂质体转染293细胞进行病毒包装.收集的病毒初液进行滴度测定后,再次通过293细胞进行病毒扩增,经过纯化后,最终获得高滴度重组腺病毒.将重组腺病毒分别感染成纤维细胞和成骨细胞,通过荧光显微镜观察,检测转染效率,利用实时定量PCR实验验证sirna的干扰效果.实验结果表明,包装后的重组腺病毒具有高的转染效率,能成功编译sirna,并具有抑制I型胶原表达的能力.

摘要：sirna作为基因功能研究和临床治疗的重要工具,已经引起了科学界的广泛关注,世界上许多学术和商业机构也开发了相应的sirna设计程序.近年来,随着对sirna机制研究的不断深入,尤其是2004年Reynolds提出sirna理性设计规则之后,许多新的理论极大地推动了sirna设计程序的发展.本文根据2003至2006年以来对sirna机制的研究进展,在原有的设计程序sirnapro的基础上进行了更新并推出了2.0版,为sirna作用机制的研究和sirna相关产品的开发提供更优质的理性设计服务.

摘要：小干扰RNA(small interfering,sirna)诱发的RNA干扰在疾病治疗中展现出巨大的潜力。然而,由于sirna的稳定性较差,缺乏靶向性,递送sirna到靶组织/细胞并诱导基因沉默仍是极具挑战的事情。核酸适配体是一类能够特异性识别靶物质的寡核苷酸序列。将核酸适配体与sirna共价结合,或与其他sirna载体连接可引导sirna进入靶组织/细胞。该文综述了近几年基于核酸适配体靶向递送sirna在疾病治疗中的设计策略及应用的研究进展,并讨论了核酸适配体介导sirna传递在临床转化方面的挑战与前景。

摘要：目的:设计并构建ErbB2的小干扰RNA,检测其对ErbB2蛋白表达的干扰效果,并检测其对乳腺癌细胞ZR75-1生长的影响。方法:设计2条针对ErbB2的sirna,并克隆到sirna表达载体pSliencer 2.1-U6 neo上。经酶切和测序证明构建成功后,将其与pcDNA3-FLAG-ErbB2共转染于293T细胞,以及单转sirna于乳腺癌SKBR3和ZR75-1细胞,通过Western blot分别检测sirna对外源和内源ErbB2的干扰效果。通过结晶紫实验研究sirna对ZR75-1生长的影响。结果:Western blot证明构建的两条ErbB2 sirna均能有效抑制外源和内源ErbB2蛋白的表达,并抑制乳腺癌ZR75-1细胞的生长。结论:构建的sirna能有效地抑制ErbB2蛋白的表达并抑制ZR75-1细胞的生长。

摘要：化疗是急性髓系白血病的标准治疗手段,然而白血病细胞多药耐药的产生为白血病化疗的主要障碍.在耐阿霉素的K562细胞株(K562/ADR)中,MRP4表达较不耐药的K562细胞株明显增高.本研究试图运用慢病毒介导的sirna沉默MRP4基因后研究能否增强K562/ADR对阿霉素的敏感性.首先设计并构建了5个针对MRP4基因的慢病毒介导的sirna(lv-shRNAs-MRP4);随后用荧光显微镜观察lv-shRNA-MRP4感染K562/ADR细胞的感染效率;用real-time PCR及Western blot检测感染lv-shRNA-MRP4后K562/ADR细胞MRP4mRNA及蛋白表达;应用MTS法及流式细胞术检测感染lv-shRNAs-MRP4后K562/ADR细胞增殖活性及凋亡.荧光显微镜观察结果可见,K562/ADR细胞lv-shRNA-MRP4感染效率达到80%以上;相比较其他lv-shRNAs-MRP4,lv-shRNA1-MRP4对MRP4基因沉默效应最强;在K562/ADR细胞中lv-shRNA1-MRP4组mRNA及蛋白表达均较对照组明显受抑;联合lv-shRNA1-MRP4与阿霉素后K562/ADR细胞生长受抑且细胞凋亡增加.上述结果提示,MRP4基因可能参与了K562/ADR细胞株多药耐药机制,慢病毒介导的sirna沉默MRP4基因可增强急性髓系白血病对阿霉素的敏感性.