摘要：研究基因功能的方法之一是减少或消除其在细胞中的表达。RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术可以研究一个单独基因的作用,其效应因子为小干扰RNA(small interfering RNAs,sirna)分子。并非所有针对某基因不同位置碱基所设计的21个碱基sirna都有相似基因沉默效率,针对同一mRNA内不同位置随机设计的sirna表现明显不同活性。sirna沉默效率主要取决于21个碱基序列的合理设计,如何设计针对目的基因的高效特异性sirna是基因沉默的关键。使用生物信息学、计算机辅助手段选择最佳sirna正成为研究的热点。[第一段]

摘要：详细说明了如何通过对特定基因mRNA序列进行分析设计具有较高基因沉默效应的sirna方法,并应用该方法针对小鼠早幼粒细胞白血病基因pml3设计相应的sirna.通过RTPCR和WesternBlot的方法,验证了其对pml3基因表达的抑制效果,实验证明通过我们提出的方法所设计的sirna具有较高的基因沉默效应.

摘要：RNA干扰(RNAi)介导的基因沉默已成为基因功能分析的高效工具,设计出高效的sirna是RNA干扰(RNAi)成功的关键,但现有的sirna设计规则存在许多不一致性,使得高效sirna设计困难重重。为了对这些设计规则进行进一步的验证并探讨不同设计规则在高效sirna设计中的价值,研究设计了9条靶向zfy基因(zfy-1、zfy-2、zfy-3、zfy-4、zfy-5、zfy-6、zfy-7、zfy-8、zfy-9)和4条靶向zfx基因(zfx-1、zfx-2、zfx-3、zfx-4)的sirna并构建了重组载体,转染28~32日龄仔猪睾丸组织分离的猪生精细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测zfy和zfx基因mRNA的表达。结果表明:每个sirna对靶基因的下调水平不同,zfy-9的沉默效率最高,为89%,zfy-1、zfy-2、zfy-3、zfx-1对靶基因的表达没有沉默作用。通过对13个sirna序列特征进行分析表明,在sirna设计中符合越多的碱基偏好性准则,沉默效率越好;但是不同的准则重要性不同,sirna反义链中第10位的U和第13位的A/U对高效sirna设计更有作用,应优先考虑;靶位点的选择对高效sirna的设计也有重要作用。

摘要：用自己编写的sirna查找设计的程序sRNAFinder,对来自GenBank的 7个冠状病毒全基因组序列进行了sirna的查找 ,并分析了各自的分布情况 .结果表明 ,ORF1ab、S、E、M和N这 5个主要基因中 ,候选sirna占全基因组中所有候选sirna的比例达到 90 %以上 .根据基因组结构特征 ,对SARS -CoV进行的sirna分布分析表明 ,在全部 4 4 9个候选sirna中 ,有 4 4 3个分布于orf1ab中 ,与基于RNAi原理的抗病毒药物设计思想相吻合 .表 8参

摘要：基因阻断技术近年来发展迅速,已成为分子生物学研究的主要技术手段之一。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA介导的、在转录后mRNA水平关闭相应基因表达的过程。RNAi最初发现于某些植物中,随后在线虫、果蝇、斑马鱼中相续发现存在RNAi现象。最近,在哺乳动物细胞中的研究也取得满意结果。RNAi作为新兴的基因阻断技术,在人类基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景。

摘要：目的分析sirna沉默人胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1基因效果的相关因素。方法设计并体外转录合成4条靶向mdr1的sirna(mdr1si326、mdr1si1513、mdr1si2631和mdr1si3071),转染SGC7901/VCR细胞,用RTPCR和免疫印迹检测mdr1mRNA和Pgp的表达、流式细胞仪检测细胞内阿霉素的蓄积和MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性,综合这4方面结果评价4条sirna的沉默效果情况;用分子生物学软分析sirna沉默效果的影响因素。结果沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列编码Pgp的跨膜区而且自身无茎和袢;沉默效果较差的mdr1si3071和最差的mdr1si1513靶序列编码Pgp的胞内区,前者自身成茎和成袢。沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列在靶位点和靶位点外间有较少的碱基配对和氢键。sirna的沉默效果与sirna3’5’端3个碱基中的A/U数量、N1和N19、GC含量间无规律可循。结论sirna沉默SGC7901/VCR细胞mdr1的效果与靶序列的结构关系密切。

摘要：In the application of RNAi technology,it is an essential step to design siR NA applicable to target *** present,there are many researches and conclusions on siR NA *** paper aims to the influences of mR NA secondary structure or siR NA antisense-strand secondary structure on siR NA silence *** paper also discusses the problems and sets out further insights in the research.