摘要：根据sirna设计原则,设计并合成5对靶向禽流感病毒(AIV)PB2基因的sirna(PB2374,PB2665,PB2936,PB21031和PB21233),将其转染MDCK细胞,分别于转染前和转染后感染H5N1禽流感病毒A/Goose/Guang dong1/96株;在转染后24h、48h和72h分别收集上清液;通过血凝试验(HA)和Real-time PCR检测sirna抑制AIV增殖的效果。血凝试验结果表明:所设计的5对sirna中,PB2374抑制AIV增殖的效率为68%～71%,PB2963抑制AIV增殖效率为78%～81%;Real-time PCR检测到PB2374转染组PB2基因的转录水平与对照组比较降低3～3.3倍,PB2963转染组PB2基因的转录水平降低3.9～4.2倍。无论sirna是先于还是迟于AIV感染,这两对sirna都能明显地抑制AIV的增殖;本研究结果为开发抗AIV治疗制剂和动物机体抗AIV研究奠定了基础。

摘要：目的筛选能有效抑制神经元NgR表达的sirna序列。方法根据sirna靶序列设计原则,设计并化学合成针对大鼠NgR基因编码区的sirna三对,并以一对无关序列的寡核苷酸作为阴性对照。原代培养的大鼠皮层神经元分为5组:sirna-1组、sirna-2组、sirna-3组、无关序列组、非转染组,用阳离子脂质体TransMessenger Transfection Reagent转染。转染后48h行RT-PCR和免疫细胞化学检测NgR表达水平的变化。结果转染48h后,与序列2、3和无关序列转染以及未转染的细胞相比,序列1转染的神经元NgR mRNA水平明显下降,并且其NgR抗体免疫荧光染色的荧光强度也明显减弱。结论化学合成sirna能有效地抑制原代皮层神经元NgR的表达。

摘要：通过GenBank数据库检索,基于小鼠MMP-9基因设计特异性的sirna干扰靶点,克隆至pGCsi-U6/Neo/GFP载体中,使用PEI衍生物包裹,转染小鼠黑色素瘤B16细胞,流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜分析细胞转染情况,RT-PCR检测24,48 h后MMP-9基因转录水平变化,筛选最佳的重组质粒和干扰靶点。结果显示:成功设计和构建了3个MMP-9-sirna干扰质粒,3个重组质粒对B16细胞的转染率分别为60.04%、63.93%和56.27%,且3个重组质粒均能有效干扰B16细胞MMP-9 mRNA的表达,其中MMP-9-sirna-2干扰效率最高(63%),可持续干扰MMP-9基因表达。这些结果提示,MMP-9-sirna-2为沉默小鼠黑色素瘤细胞MMP-9基因最优的sirna重组质粒。

摘要：目的观察RNA干扰技术沉默Annexin-1基因表达对膀胱癌T24细胞增殖能力的影响。方法针对Annexin-1基因不同部位设计并化学合成3对不同的靶向小干扰RNA(sirna),脂质体介导瞬时转染膀胱癌T24细胞,转染后应用半定量RT-PCR和Western印迹法检测Annexin-1mRNA和蛋白的改变,透射电镜观察细胞凋亡情况,用MTT法检测沉默Annexin-1表达对膀胱癌T24细胞增殖的影响。结果转染sirna后膀胱癌T24细胞Annexin-1mRNA和蛋白水平显著下降(P<0.05),转染sirna沉默Annexin-1基因表达后膀胱癌T24细胞出现典型凋亡细胞,增殖能力显著下降(P<0.05)。结论 RNA干扰Annexin-1基因后其mRNA和蛋白水平显著下降,诱导了膀胱癌T24细胞凋亡,并且抑制细胞的增殖。

摘要：目的观察RNA干扰沉默膜联蛋白-1(Annexin-1)基因表达技术对膀胱癌T24细胞Annexin-1基因表达和顺铂耐药的影响。方法针对Annexin-1基因不同部位设计并化学合成3对不同的靶向小分子干扰RNA(sirna),脂质体介导瞬时转染膀胱癌T24细胞,转染后应用半定量RT-PCR和Western印迹检测Annexin-1mRNA和蛋白的改变,用MTT法检测沉默Annexin-1表达在膀胱癌T24细胞对顺铂敏感性的变化。结果转染sirna后膀胱癌T24细胞Annexin-1的mRNA和蛋白水平显著下降(P<0.05),增强细胞对顺铂的敏感性(P<0.05)。结论 RNA干扰Annexin-1基因后其mRNA和蛋白水平显著下降,并且增强T24细胞对顺铂的敏感性。

摘要：向结肠癌SW480细胞中导入针对Survivin基因的sirna,研究RNA干扰对SW480细胞增殖和凋亡的影响,为结肠癌的基因治疗提供实验依据,同时寻求新的、有效的RNA干扰片段。设计3条特异性干扰靶向Survivin基因的sirna,转染24,48,72h后,Western蛋白印迹法检测Survivin蛋白变化,同时噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖。3条sirna分别作用于SW480细胞,转染24,48,72h后,3组Survivin蛋白表达均出现下调(P<0.05),在48h时达到顶峰,抑制率分别为66.5%±2.1%,49.6%±2.8%和47.8%±3.1%,差异具有统计学意义(P<0.05);MTT法显示Survivin基因沉默后,细胞增殖受到明显抑制。脂质体所介导的体外Survivinsirna,能有效地沉默结肠癌细胞的Survivin基因,从而抑制结肠癌细胞的增殖和促进细胞的凋亡,特别是针对保守区域设计的靶向sirna,干扰效果更为显著。

摘要：目的研究sirna对生长抑素(SOM)基因表达的抑制作用。方法根据SOM全长cDNA序列设计和合成RNA干扰的靶序列,应用T7RiboMAXTM体外转录合成sirna并转染胃癌细胞系BGC-823,经RT-PCR,免疫组化法检测SOMmRNA和蛋白的表达水平。结果sirna可以特异性抑制SOM基因的表达。结论通过体外合成sirna可以特异性抑制SOM基因的表达,为筛选抑制SOM基因表达的有效序列研究奠定了基础。

摘要：目的:探讨人α-2,6-唾液酸转移酶(ST6GalI)小分子干扰RNA(sirna)对ST6GalI高表达的结肠癌SW480细胞株的黏附和侵袭力的影响。方法:设计并合成ST6GalI靶向的sirna,用脂质体Lipofectamine2000包裹后转染SW480细胞。实验设空白对照组、脂质体对照组、非特异性sirna组和ST6GalIsirna组,采用RT-PCR测定细胞中ST6GalImRNA表达水平,流式细胞术检测细胞表面α-2,6-唾液酸含量,并分别用CytoMatrixTM细胞黏附试剂盒及细胞侵袭分析试剂盒,检测细胞对细胞外基质(ECM)黏附与侵袭力。结果:与空白对照组、脂质体对照组、非特异性sirna组相比,转染48h后,ST6GalIsirna组细胞中ST6GalImRNA表达明显下调;转染72h后,ST6GalIsirna组细胞表面α-2,6-唾液酸的含量及细胞对ECM的黏附和侵袭力均明显低于其他3个对照组(P<0.05)。结论:化学合成的靶向ST6GalI的sirna能够下调SW480细胞中ST6GalI基因的表达,降低细胞对ECM的黏附和侵袭力。本实验为进一步研究应用RNA干扰技术抗肿瘤治疗奠定基础。

摘要：设计并合成了2条特异性抑制CFL2的sirna,用其转染C2C12细胞后分别采用RT-PCR和western blot检测细胞CFL2 mRNA和蛋白的表达情况,并用免疫荧光法对CFL2进行细胞定位。结果表明,设计的2条sirna均能不同程度地抑制CFL2的mRNA和蛋白表达,当sirna浓度为50 nmol/L时,其对CFL2-1 mRNA和蛋白的抑制率分别为88%和84%。

摘要：为筛选能够有效抑制J亚型禽白血病病毒(ALV-J)复制的sirna,本研究根据ALV的pol基因保守序列设计合成5对shRNA序列,并将其分别克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体中,构建sirna表达重组质粒,分别为pcDNA-sh-pol711、pcDNA-sh-pol814、pcDNA-sh-pol1016、pcDNA-sh-pol1915和pcDNA-sh-pol2516。将重组质粒分别转染DF-1细胞6h后,以100TCID50的ALV-J感染细胞,并利用IFA、westernblot和real-timePCR方法评价其对ALV-J复制的抑制效果。IFA和westernblot检测结果表明:其中pcDNA-sh-pol711、pcDNA-sh-pol814和pcDNA-sh-pol2516可以有效抑制病毒囊膜蛋白的表达。Real-timePCR结果显示:与阴性对照和空载体对照相比,这3种sirna在mRNA水平对ALV-J的抑制率达29%～86%。本研究在细胞水平上筛选的sirnas可作为候选sirnas,为抗鸡ALV-J的研究奠定基础。