摘要：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168菌株基因组中含有编码surfactin合成酶系的srfA操纵子,却不产抗菌肽surfactin。运用同源重组的方法将外源的有活性的sfp基因(编码4'-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶)整合入*** 168中,将其改造为产surfactin的菌株。通过分析多株枯草芽孢杆菌和解淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的sfp基因,从基因的上、下游找出较为保守的区域,设计引物,从枯草芽孢杆菌Nja-9中扩增sfp基因,将获得的sfp基因与P43启动子和终止子相连,构建了sfp基因表达框,并连接于枯草整合质粒pDG1730上,最终构建了枯草芽孢杆菌整合质粒pST-1730,利用pST-1730本身的淀粉酶E基因与*** 168菌株的基因组DNA进行同源重组整合,获得了产surfactin的重组菌株***121。本研究为surfactin合成酶基因的改造和分析奠定了基础。

摘要：利用Placket-Burman设计和响应面法对产3-羟基丁酮Bacillus subtilis SF4-3的发酵培养基进行优化,首先通过Placket-Burman设计筛选出影响较大的3个因素,分别为酵母膏、玉米浆和尿素,然后进行最陡爬坡实验逼近最佳响应面区域,最后根据Box-Benhnken的中心组合设计原理,进一步进行响应面分析实验,得到3因素的最佳浓度。在优化培养基下,3-羟基丁酮的产量达51.2g/L,比优化前提高了51%。

摘要：从中国传统豆豉中分离筛选出一株高产纤溶酶菌株Bacillus subtilis DC33,并研究营养和环境因素条件对DC33产酶的影响。在单因素水平试验基础上,选择对DC33产纤溶酶影响较大的聚蛋白胨、半乳糖、硫酸镁、硫酸锂和吐温80五因素,通过正交旋转组合设计得到DC33产酶活力与营养因素水平的回归方程,极值分析得DC33优化发酵培养基(g/L):聚蛋白胨22,半乳糖1.56,硫酸镁0.5,硫酸锂0.01,K2HPO42.0,NaH2PO41.0,CaCO32.0,吐温80 0.33 mL。在此条件下,DC33产纤溶酶达到780 U/mL,较优化前提高86.7%。

摘要：α-乙酰乳酸脱羧酶是2,3-丁二醇生物合成途径的关键酶之一,利用生物信息学方法对α-乙酰乳酸脱羧酶基因(alsD)进行分析。根据GenBank中α-乙酰乳酸脱羧酶基因(alsD)的基因序列设计引物,以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC10026基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到Bacillus subtilis CICC10026基因片段alsD。对该片段进行序列测定,利用生物信息学分析软件对该序列进行同源性分析、二级结构和功能性分析及3D结构预测等。结果表明:获得的alsD片段为768 bp,未发生碱基突变,该片段为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC10026的α-乙酰乳酸脱羧酶基因(alsD)的基因序列。本研究结果为构建产2,3-丁二醇的工程菌株奠定了理论基础。