摘要：为了优化和筛选谷子中高效的CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISRP-associated nuclease 9)基因编辑系统,针对谷子八氢番茄红素脱氢酶基因(SiPDS)设计6种gRNA(gRNA1—gRNA2针对外显子1,gRNA3—gRNA6针对外显子12),构建多种CRISPR/Cas9基因编辑系统,通过聚乙二醇(PEG)介导的方法转入谷子原生质体中,然后利用开发的大规模平行测序技术快速检测它们对SiPDS的突变效率。结果表明,采用7 d谷子黄化苗幼茎建立的原生质体转化系统的转化效率较高,为50.44%~57.36%。将Super启动子(SP)、谷子内源的泛素启动子(Ubi)分别驱动Cas9基因的基因编辑系统转入谷子原生质体中,发现两者对SiPDS基因的突变效率分别为0.5%、5.5%。随后采用Ubi启动子驱动Cas9基因,比较单一gRNA、双gRNA和trna结构的基因编辑系统对SiPDS基因的突变效率,发现双gRNA基因编辑系统Ubi-dgRNAE1和Ubi-dgRNAE12的突变效率分别较单一gRNA基因编辑系统提高了1.66倍和1.11倍;trna基因编辑系统Ubi-trna的突变效率较单一gRNA基因编辑系统提高了5.87倍,为51.24%,且Ubi-trna可同时针对多个位点进行编辑,其多位点突变频率为3.23%。比较gRNA3、gRNA4、gRNA5体外转录产物分别与Cas9蛋白混合制成的核糖核蛋白(RNP)复合物的体外切割活性,发现RNP-gRNA5复合物体外切割活性最高,其对SiPDS基因的突变效率是2.0%,并且引起的突变类型主要为小于3 bp的缺失。

摘要：受医院床头牌的启发，笔者设计制作了氨基酸信息速查盘。教学实践证明，该教具对教师传授及学生掌握氨基酸的结构通式、种类，领会氨基酸密码子、反密码子、trna、mRNA间的关系非常有帮助。现就其制作、使用及特点加以叙述。

摘要：目的探讨毒力岛及外源DNA片段的插入与异常trna位点的相关性。方法采用PCR和杂交的方法,从异常trna位点寻找致泻性大肠杆菌和志贺氏菌的福氏2a菌基因组中可能的毒力岛或基因组岛。以Escherichia coli K12MG1655序列中的86个trna位点的45个区域设计引物,对与K12亲缘较近的几类菌株的相关trna及其临近序列的完整性进行了初筛,对发现异常者进一步从其内部补充引物扩增证实,并联合杂交方法进行验证,以已知的*** O157∶H7EDL933和***2a301的序列来对比PCR结果。结果菌株EDL933,***2a301,EPEC2348/69,ETEC10407,EIEC8401,***157∶H78823/64,EAEC O42,*** O25F171中异常trna位点的个数分别是14,18,15,14,15,11,21,19。通过序列比对EDL933中8个trna位点有O岛插入,***2a301中有6个插入了毒力岛,其余的位点均有外源片段插入或原有片段缺失。结论毒力岛及外源DNA片段的插入与异常trna位点密切相关。

摘要：Crick(1955)预见到细胞内存在一种小分子RNA称为"衔接子",并假定它是一种沟通DNA与蛋白质序列之间的中介体。Zamecnik(1955)发现sRNA(trna),Hoagland(1954)发现氨基酸激活酶(氨基酰-trna合成酶)。镁离子稳定trna的二级结构(1963),由此,可以得到大的寡核苷酸片断,甚至trna的半分子。这项技术大大推动了trna及其他RNA序列分析工作的迅速进展。Holley(1965)首次测定出酵母trnaAla全部核苷酸序列,并设计出一种"三叶草"二级结构。Crick(1966)较早地提出"摆动假说",即反密码子5’端的碱基并不与密码子3’端碱基严格配对,允许有一定的摆动。Rich(1974)等用X射线晶体衍射法,阐明了酵母trnaPhe的高级结构(呈L型)。2000年,英国剑桥科学家,使用在冰箱保存了15年的酵母trnaPhe晶体,重新测定它的L型结构是正确的,并严格确定其中10个镁离子和一个精胺分子的精确部位。

摘要：trna是古老而具有多功能的小分子,具有复杂的倒'L'型高级结构.L形的trna结构为二维对称,因此可以将它分解为对应于双链螺旋结构的两部分,分别毗邻T环和反密码环.trna的主要功能是活化专一的氨基酸并携带氨基酸参与蛋白质生物合成.研究发现,有一些模拟trna结构特征的类似物,可参与其它生物功能.随着人们对trna结构和功能认识的逐渐积累,已经可以设计一些非天然的trna类似物.对这些类似物的研究,揭示了生物体复制、翻译和代谢途径之间的联系,为生命进化过程的探索提供了有力的工具,并导致一些生物技术的应用.另外,关于校正trna的研究也为蛋白质工程开辟了广阔的应用前景.

摘要：核酸序列测定是基因研究的重要手段,本世纪60年代和70年代,科学家们一直致力于研究测定核酸序列的方法.