摘要：目的:从中华大蟾蜍(Bufo gargarizans Cantor)肝脏组织中克隆细胞色素P450还原酶基因(BgCPR,GenBank登录号:OQ572435)进行生物信息学分析,并进行功能验证。方法:基于中华大蟾蜍转录组数据库挖掘BgCPR基因序列,使用SnapGene软件设计BgCPR基因两端特异性引物,以蟾蜍肝脏组织总RNA逆转录成的cDNA为模板进行PCR扩增。利用生物信息学分析BgCPR蛋白理化性质、空间结构并构建系统进化树;基于CRISPR/Cas9基因编辑系统将蟾蜍BgCPR基因表达框经同源重组整合进入酿酒酵母基因组,利用聚乙二醇法制备转化子微粒体,验证其对细胞色素C的还原功能。结果:克隆得到全长2043 bp的BgCPR基因cDNA,编码680个氨基酸,相对分子质量77852 Da。结构预测显示,BgCPR蛋白为非分泌蛋白;有一段跨膜螺旋区,位于蛋白的第24~46位氨基酸之间;亚细胞定位预测显示该蛋白定位于内质网上。采用体外酶活实验证明其具有传递电子功能。结论:本研究克隆得到中华大蟾蜍BgCPR基因,并构建了表达具有生物活性的BgCPR的酿酒酵母工程细胞,为进一步研究蟾蜍CYP450基因功能乃至解析蟾蜍二烯内酯类化合物的生物合成途径奠定了基础。

摘要：目的：制备去氢骆驼蓬碱醇质体并对其处方进行优化,为该药物的后续研究与开发提供参考。方法：采用乙醇注入法制备去氢骆驼蓬碱醇质体,以乙醇体积分数、卵磷脂用量、卵磷脂与胆固醇的用量比为考察因素,以粒径,Zeta电位和包封率为评价指标,应用三因素五水平星点设计-效应面法对去氢骆驼蓬碱醇质体的处方进行优化,并考察该制剂的初步稳定性。结果：最佳处方为去氢骆驼蓬碱0.03%,蛋黄卵磷脂1.13%,卵磷脂-胆固醇（41.55∶1）,乙醇体积分数28%。制得的醇质体大小均一、圆整、分散均匀,包封率、粒径及Zeta电位平均值分别为79.0%,124.8 nm,-57.1 m V。结论：去氢骆驼蓬碱醇质体制备工艺简单、处方设计合理、稳定性较高,为进一步探讨该制剂的皮肤给药奠定了基础。

摘要：目的优化舒心通脉颗粒提取工艺。方法以加水量、煎煮时间为影响因素,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、6-姜辣素、香蒲新苷+异鼠李素-3-O-新橙皮苷含有量及浸膏得率为评价指标,星点设计-响应面法结合G1-熵权法优化提取工艺。结果最佳条件为炮附子加6倍量水先煎1.5 h,其余4味药材(干姜、白术、黄芪、蒲黄)倒进上述药液,加6倍量水煎煮45 min,滤过,药渣加12倍量水煎煮45 min,滤过,合并滤液,浓缩至密度为1.01 g/mL,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、6-姜辣素、香蒲新苷+异鼠李素-3-O-新橙皮苷含有量分别为0.45、1.95、3.84 mg/g,浸膏得率34.86%,综合评分93.11。结论该方法稳定、合理、可行,可用于提取舒心通脉颗粒。

摘要：目的优化鹿红方颗粒提取工艺。方法以加水量、煎煮时间为影响因素,羟基红花黄色素A、没食子酸、沉香四醇、马钱苷、异补骨脂苷、补骨脂苷、特女贞苷含量及浸膏得率为评价指标,星点设计-响应面法结合G1-熵权法优化提取工艺。结果最佳条件为煎煮2次,第1次加14倍量水浸泡45 min后煎煮80 min,第2次加10倍量水煎煮45 min,滤过,合并滤液,转移至1000 mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,羟基红花黄色素A、没食子酸、沉香四醇、马钱苷、异补骨脂苷、补骨脂苷、特女贞苷含量分别为13.96、2.44、12.83、7.23、9.40、13.55、19.00 mg/g,浸膏得率为20.49%,综合评分为96.51分。结论该方法合理、稳定、可行,可用于提取鹿红方颗粒。

摘要：目的考察骆驼蓬总生物碱提取物与药用辅料的相容性,为骆驼蓬总碱片的处方设计提供依据。方法采用影响因素实验结合差示扫描量热分析法(DSC)及有效成分含量测定等考察骆驼蓬总生物碱提取物与辅料的相容性。结果骆驼蓬总生物碱提取物及其辅料混合物在高温和光照条件下性质稳定。高湿条件下,吸湿增重均不超过5%,但第10天的指标成分含量下降较明显,出现结块现象。差示扫描量热分析法分析结果表明,骆驼蓬总生物碱提取物与乳糖、硬脂酸镁混合物的DSC图谱峰形、峰位置发生较为明显的位移和变化。结论骆驼蓬总生物碱提取物不宜在高湿条件下贮存,而且不宜与乳糖和硬脂酸镁配伍。

摘要：经典名方生脉方由人参、麦冬和五味子三味中药配伍组成,是中药益气养阴生津的代表方。近代根据不同医疗应用相继研制出多种生脉制剂,但是上述制剂的质量标准水平参差不齐,且大多数仅规定了单味药物的个别成分,难以保证临床用药的有效性、安全性。同时近年来随着生脉方的理化鉴别方法不断迭新,对其主要化学成分皂苷类、木脂素类和黄酮类的研究日益完善,但少有针对其成方制剂分析方法的系统性归纳。本文依据现有文献归纳了生脉方中近年来新发现的化合物成分,同时系统性总结生脉方制剂的质量标准及分析方法,以期给经典名方的研究、开发和应用提供参考依据。

摘要：目的采用HPLC法同时测定当归提取物中阿魏酸和藁本内酯的含量,优化当归提取物的制备工艺。方法以阿魏酸和藁本内酯为指标成分,比较水提法、碱水提法、乙醇浸渍法、乙醇热回流法、乙醇醇渗滤法的优劣,确定制备当归提取物的工艺路线;采用L9(34)正交试验设计优化其提取工艺。结果阿魏酸0.112～1.125μg与峰面积线性良好(r=0.9999),平均回收率为99%(RSD=2.91%),藁本内酯1.368～13.680μg与峰面积线性良好(r=0.9999),平均回收率为104%(RSD=1.46%)。当归提取物的制备方法为乙醇渗滤法,最佳工艺条件:用70%乙醇浸渍24h,渗滤10倍量。结论乙醇渗滤法提取效率高,重复性好,可为当归流浸膏采用乙醇渗滤法制备提供依据;HPLC法可用于当归提取物中阿魏酸和藁本内酯的定量分析。

摘要：目的采用星点设计-效应面法优化穿心莲的超声提取工艺。方法以乙醇浓度、提取时间和溶媒比为自变量,以穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的收率和浸膏得率为因变量,通过对自变量的总评归一值进行多元线性回归和二项式拟合,采用效应面优化最佳的工艺条件。结果确定超声提取工艺条件为乙醇浓度(X1):70%～80%;提取时间(X2):50～70 min;溶媒比(X3):10～12倍,工艺验证的总评归一预测値与实测值的偏差为-2.6%,二项式拟合的复相关系数r=0.971 3。结论采用星点设计-效应面法优选方法优化的穿心莲内酯提取工艺,方法简便、预测性良好。

摘要：目的优化鹿红方颗粒制备工艺,并对其进行质量评价。方法基于质量源于设计(QbD)理念,以干浸膏粉与辅料(淀粉-甘露醇=1∶0.3)比例、润湿剂(乙醇)体积分数、润湿剂用量为影响因素,成型率、溶化率、吸湿率、休止角为评价指标,正交试验优化制备工艺。采用物理指纹图谱、化学特征图谱分别对物理属性指标、化学特征成分进行综合表征,评价质量一致性。结果最佳条件为干浸膏粉与辅料比例1∶1.8,润湿剂体积分数90%,润湿剂用量16%,在60℃下干燥1 h。5批样品物理指纹图谱、化学特征图谱相似度均大于0.99,其物理、化学性质无明显差异。结论该方法稳定可行,可为鹿红方颗粒相关新药开发奠定基础,也能为其他中药制剂相关研究提供思路。

摘要：以高压均质法制备穿心莲内酯固体脂质纳米粒。采用星点设计考察药物与脂质材料(即单硬脂酸甘油酯与山嵛酸甘油酯的1∶1混合物)比例、卵磷脂与脂质材料比值及表面活性剂(吐温-80)浓度对包封率和载药量的影响,并对结果进行多元线性和二项式方程拟合,用效应面法预测最佳处方。结果表明,载药量的多元线性回归拟合方程具有良好的相关性,而包封率的二项式拟合方程优于多元线性回归拟合方程。优化处方为药脂比9%、卵磷脂与脂质材料比值为1.6、吐温-80浓度为3%。优化后固体脂质纳米粒的包封率和载药量分别为(91.0±0.9)%和(3.49±0.03)%,粒径为(286.3±8.0)nm,电位为(-20.6±0.2)mV。