摘要：目的建立一种含内参的,针对登革病毒和基孔肯雅病毒核酸检测的3重荧光定量PCR方法。方法针对登革病毒3'端非结构蛋白编码区和基孔肯雅病毒5'端非结构蛋白编码区设计引物与探针,建立一套含有内参的并且能同时检测登革病毒和基孔肯雅病毒的3重实时荧光定量RT-PCR方法。对其最低检测限和特异度进行验证,通过检测血清标本对该方法进行临床应用评估。结果建立的3重荧光定量PCR登革病毒与基孔肯雅病毒绝对定量标准曲线显示,病毒拷贝数的对数值与CT值之间具有良好的线性关系,梯度稀释后的标准品核酸检测均呈现典型的S型曲线。检测日本脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、辛德毕斯病毒各1株,结果均为阴性,特异度为100%。用该方法检测294份登革热患者血清,灵敏度为100%,特异度为89.3%,阳性预测值为92.1%,阴性预测值为100%;测定33份基孔肯雅热病患者血清的灵敏度、特异度及阴、阳性预测值均为100%。结论建立的含有内参的能同时检测登革病毒与基孔肯雅病毒的3重荧光定量PCR方法具有较高的灵敏度和特异度,可用于登革病毒与基孔肯雅病毒感染检测,为早期筛查和鉴别登革病毒和基孔肯雅病毒感染提供依据。

摘要：目的建立适合国境口岸入境生物材料中快速判断是否含有人源基因的实时荧光PCR检测方法并应用于口岸出入境生物材料的检测,为入境生物材料监管提供技术支撑。方法根据人线粒体ND2基因核酸序列,设计并筛选适合实时荧光PCR检测的引物和探针,优化反应体系,评估方法的灵敏度、特异性、稳定性,建立快速、特异的人源基因荧光PCR检测方法。结果建立的检测方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,可在2 h内完成入境生物材料的检测,并有效区分非人灵长类动物及常见哺乳动物基因。结论本方法适用于对入境生物材料中人源基因的快速、准确检测,为口岸科学执法提供依据。