摘要：为探究抗原特异性T细胞功能动态变化与卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)保护时效的相关性,采用酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)和流式细胞术对上海地区健康志愿者外周抗原特异性CD4^(+)T细胞应答水平进行评估。结果显示,IFN-γ水平随着个体年龄的增长而升高(P<0.05);30岁以上人群分泌抗原特异性IFN-γ的CD4效应T细胞(effector T cell,T_(eff))比例显著升高(P<0.01),同时18岁以上人群分泌IFN-γ的CD4记忆T细胞(memory T cell,T_(M))比例显著下降(P<0.05);成年人IL-17α^(+)CD4^(+)T细胞和CD4^(+)T_(eff)比例均显著高于青少年人群(P<0.01);此外,18~29岁人群外周CD4^(+)初始T细胞(na6ve T cell,T_(N))和CD4^(+)T_(eff)以分泌IL-17α为主,而大于30岁的人群外周分泌IFN-γ的CD4^(+)T_(M)比例下降(P<0.0001),且二者趋向于平衡。上述结果提示,接种BCG后,个体随年龄增长其外周抗原特异性的Th1和Th17 T_(eff)和T_(M)格局发生变化,可能在抗结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染中发挥一定的保护作用。因此,设计特定的亚单位结核疫苗以加强长效免疫T_(M)的保护性将对结核病的防控具有重要意义。

摘要：对客观规律的认识,是一个从实践到理论,再从理论到实践,不断循环和深化的过程。其中,新理论的提出,代表了对已有认识的系统归纳和对发展方向的深入思考,有助揭示事物的本质,最终把学科推向前进。任何一个学科的发展,离不开新的理论和各种学说,免疫学也不例外。突出的例子,是用以解释抗体多样性产生的《克隆选择学说》。该学说由Mac-Farlane Burnet在上世纪五十年代倡导,其核心,一是强调适应性免疫应答的抗原特异性,是基于抗原对多样性极为丰富的淋巴细胞抗原受体库(Repertoire)的选择;第二,被选择的不是抗原受体或抗体分子本身,而是带有特定受体结构的淋巴细胞克隆。这一理论,解释了免疫学中诸多最具本质的现象,如对抗原的精细分辨、淋巴细胞的克隆性应答、二次增强反应、免疫记忆等,同时为抗体亲和力成熟和独特型网络学说提供了理论依据,并有助于发展出诸如单克隆抗体等极具产业化前景的技术,说明一个创新性理论往往具有超越时空的魅力。该理论已用于免疫学的各个方面,包括中枢耐受形成所涉及的克隆流产理论。当然,现时并不认为克隆流产是引起中枢耐受的全部机制,但克隆流产仅仅是克隆选择学说作出的一个外推(Extrapolation)。

摘要：硫酸胆固醇(cholesterol sulfate,CS)是人体中重要的类固醇硫酸酯,由胞浆磺基转移酶(sulfotransferase,SULT)2B1b催化合成,发挥多种重要的生理作用。其广泛分布于人体,如皮肤、肾上腺、肝脏、肺、脑和子宫内膜等。CS在表皮中参与角质层角化套膜的形成和角质细胞分化标志物的表达,从而调节表皮脱屑和屏障功能;在免疫系统胸腺细胞形成的过程中CS抑制T细胞受体信号的传递,并且CS/胆固醇比例直接影响T细胞的胸腺选择,由此参与成熟T细胞受体组库的塑造;CS通过减少氧化应激、维持线粒体膜稳定和增加能量储备调节脑代谢和发挥神经保护效应。此外,CS还通过调节功能蛋白的活性参与多种疾病的发生发展过程。催化CS脱硫的类固醇硫酸酯酶(steroid sulfatase,STS)基因发生缺失突变直接导致了X连锁鱼鳞病(X-linked ichthyosis,XLI)的发生;CS通过促进β淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)聚集参与阿尔茨海默病的发生发展;CS通过抑制肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)的活化来调控糖异生,其衍生物有望用于治疗2型糖尿病;CS在多种癌症中均有异常表达,可与基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)相互作用诱导癌细胞的聚集和转移。现阶段的研究重点是在病理生理条件下揭示其具体的分子机制,并由此设计可行的临床治疗方案。

摘要：构建OVA66基因的特异小干扰RNA表达载体,转染HeLa细胞,分析对该基因表达和肿瘤生物学特性的影响。以RT-PCR、Westernblot方法检测OVA66基因在多种肿瘤细胞系的表达谱。利用计算机辅助设计和合成针对OVA66的特异小干扰RNA的DNA片段,定向克隆于特定的干扰载体(pSUPER)。利用脂质体法将重组载体转染于OVA66高表达细胞系HeLa,筛选得到shRNA-OVA66稳定表达细胞。采用Real-timePCR检测目的基因的表达;FACS、Westernblot方法分析目的蛋白的表达。MTT、3H-TdR掺入等方法检测干扰OVA66基因表达后对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。双酶切鉴定得到针对OVA66基因特异的shRNA表达载体(pSUPER-shRNA-OVA66),并经序列分析证实。经检测pSUPER-shRNA-OVA66稳定表达的HeLa细胞(shRNA-OVA66)中目的基因mRNA水平降低;OVA66蛋白表达受到抑制,表明设计的靶片段对目的基因有显著的抑制效果。并显示shRNA-OVA66细胞DNA合成下降;细胞周期分析表明阻断OVA66基因表达可抑制shRNA-OVA66细胞增殖能力,并引发细胞凋亡。OVA66特异的shRNA表达载体构建成功,阻断OVA66基因表达可抑制细胞增殖,促使细胞凋亡,为OVA66蛋白肿瘤生物学功能与肿瘤发生、发展的研究奠定基础。

摘要：肿瘤微环境是指肿瘤发生发展的复杂组织环境,在肿瘤的生长、侵袭和转移过程中发挥重要作用。深入探究肿瘤微环境的组成和促瘤机制对发掘新的肿瘤治疗靶点具有重要意义。现以肿瘤微环境中的免疫细胞、间充质细胞和内皮细胞为切入点,概述它们与肿瘤细胞之间的相互作用,探讨肿瘤微环境通过抑制免疫细胞、调控间充质细胞和诱导血管生成来促进肿瘤的发生、发展和转移的调控机制,最后对靶向肿瘤微环境的免疫疗法进行了展望。

摘要：为了探讨RNA干扰技术对小鼠CⅡTA(II类反式激活因子)以及MHC Ⅱ类基因表达和功能的影响。我们首先设计并合成4条小干扰RNA(small-interfering RNA,siRNA)(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3和siRNA-4)序列,在阳离子脂质体的介导下转染小鼠L929细胞。48h后,用半定量RT-PCR和定量PCR方法检测CⅡTA mRNA的变化;流式细胞仪检测I-Ab分子表达的变化。接着构建了CIITA特异的短发夹状干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体,通过在靶细胞内转录形成具有特异干扰作用的shRNA,高效、特异的阻断CⅡTA基因的表达,形成Ⅱ类基因功能缺陷或使其表达降低。进一步混合淋巴细胞反应观察同种异基因CD4+T细胞对稳定转入RAN干扰载体的L929细胞的免疫应答强度,结果证实该L929细胞对不同受者CD4+T细胞的刺激能力分别下降73.90%和76.34%。以上结果为减低同种异体/异种器官细胞性排斥提供了新的思路和手段。

摘要：免疫记忆是机体内可与神经记忆功能相媲美的复杂性过程,它具有精确、快速识别并迅速清除再次感染病原菌的能力,是获得性免疫应答的核心成分。CD8＋T细胞作为机体抗感染和抗肿瘤免疫应答的主要执行者,在完成免疫应答后能进一步分化为CD8＋记忆性T细胞,

摘要：为阐明冬凌草甲素(ORI)抗小鼠H22肝癌中的T细胞免疫应答机制,本研究利用C57/BL6小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,随机分为荷瘤对照组(PBS组)、ORI高、中、低剂量处理组(75、50、25mg·kg^(-1)·d^(-1))、阳性对照组(5-Fu组)和空白组(NC组),连续腹腔注射给药12d后处死。以瘤重、抑瘤率观察ORI对移植瘤生长的影响;用乳酸脱氢酶释放法检测对小鼠H22细胞杀伤活性;流式细胞术检测小鼠脾脏细胞中CD4^+T细胞分泌IL-17、IL-2、TNF-α、IFN-γ等细胞因子能力,并检测CD8^+T和CD4^+T细胞表面PD-1的表达。结果显示:低、中、高剂量ORI处理组和荷瘤对照组比较均有显著性缩小(P<0.05);ORI能明显提高荷瘤小鼠脾脏细胞对H22细胞的杀伤活性(P<0.05);抑制CD4^+T细胞中细胞因子的分泌,尤其对IL-17和IL-2的抑制最为明显,对TNF-α和IFN-γ抑制在ORI高浓度情况下发挥作用;同时,ORI处理组中CD8^+T细胞的PD-1表达降低,而CD4^+T细胞表面PD-1的表达呈现一定程度的上调。上述结果表明ORI对小鼠H22肿瘤具有明显的体内抑瘤作用,除了直接的杀伤作用外,ORI还可以通过提高CD8^+T的杀伤作用,降低CD4^+T细胞的炎症特性发挥抗肿瘤免疫应答功效,其中的可能机制是影响两种细胞表面PD-1的表达。因此,ORI还可通过协同T细胞抗肿瘤免疫应答机制促进对肿瘤的抑制作用。

摘要：激动型抗CD40单抗能够激活APC表面CD40免疫共刺激信号,促进其成熟和交叉提呈抗原并激活抗原特异性CTL以杀伤肿瘤,多年来一直是肿瘤免疫治疗的研究热点。以鼠源抗体为基础的研究表明,激动型抗鼠CD40单抗的活性受到抑制性Fcγ受体(FcγRⅡB)的驱动,但尚不清楚这一调控机制是否影响人类抗人CD40(hCD40) IgG单抗。为此,作者研究了Fcγ受体(Fcγreceptor, FcγR)结合能力对人类抗hCD40单抗活性的影响,发现抗体恒定区(Fc)失去FcγR结合能力会严重削弱人类激动型抗hCD40 IgG1单抗活性;同时,FcγRⅡB特异性阻断抗体可以显著抑制人类激动型抗hCD40 IgG1单抗活性;此外,增强抗体Fc的FcγRⅡB结合能力能够提高抗体的激动活性。而且,多个抗原结合表位不同的人类抗hCD40单抗在实验中表现一致,说明抗CD40单抗的激动活性普遍依赖于FcγRⅡB。上述研究有助于探索激动型抗CD40单抗的活性调控规律,为设计更好的激动型抗hCD40抗体提供思路。

摘要：结核病是全球重要的传染性疾病之一,在全球范围内保持着较高的发病率和死亡率。卡介苗是目前临床上唯一应用的结核疫苗,虽然对儿童有较好的保护作用,但对成人的免疫保护效果并不明显。研发新的结核疫苗对于结核病的防控具有重要的意义。由于结核病的致病菌结核分枝杆菌主要通过呼吸道传播,机体的黏膜成为抵御结核分枝杆菌的第一道防线。设计稳定高效的抗结核黏膜免疫疫苗是目前结核疫苗研究的新方向之一。选择合适的黏膜免疫途径、佐剂及抗原递送系统是黏膜疫苗研发成功的关键。本文对抗结核分枝杆菌的黏膜免疫应答作简短的概述,并重点阐明黏膜免疫在结核疫苗研发中的研究进展。